[求助]怎样消化贴壁很紧的上皮细胞]

最新回复

• yes4 (2012-7-24 15:03:23)

  
  有两个要注意的地方：
  1。首先消化的时候千万不要等到细胞完全融合，也就是俗称的长‘老’了在消化，这样是很难消化的，一般在大概90％融合的时候消化比较好，这点是很重要的。
  2。消化时放在37度的时候不要总是拿出来看，放置10－15分钟后在拿出来看看，不然间歇的拿出来看，实际上温度没有达到37度。

• pencil菲 (2012-7-24 15:03:44)

  
  估计消化不下来的原因就是细胞老化了

• dragonkilly (2012-7-24 15:04:09)

  有两个要注意的地方：
  1。首先消化的时候千万不要等到细胞完全融合，也就是俗称的长‘老’了在消化，这样是很难消化的，一般在大概90％融合的时候消化比较好，这点是很重要的。
  2。消化时放在37度的时候不要总是拿出来看，放置10－15分钟后在拿出来看看，不然间歇的拿出来看，实际上温度没有达到37度。
  
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  以上正解，另补充三点：
  一、注意胰酶的活性，1、初买的胰酶的活性；2、胰酶在PH7.8时活性最强；3、温度对活性的影响，如上提到过；4、宜低温保存，切不可室温或水浴时间过长致活性下降。
  二、可提高胰酶浓度和使用量
  三、联合EDTA使用。

• wmp1234 (2012-7-24 15:04:26)

  
  可以消化两次 第一次目的是尽量使细胞松动，再次消化时保证37度。

• wmp1234 (2012-7-24 15:04:50)

  
  补充一下，我是培养乳腺上皮细胞的，也比较难消化，我的观点是，首先是胰酶,最好是从－20度冰箱中取出后在37度温育10分钟左右，然后是先用少许的0.05％的胰酶覆盖细胞后吸取消化液靠残留的消化液消化，显微镜下观察大部分细胞变圆后再加入消化液消化，同时分批次将已上浮的细胞吸走，及时的中止消化，这样的话消化后的细胞活力较强，不知道是否适合人晶状体上皮细胞，可以试一下！

• langlang (2012-7-24 15:05:13)

  
  弃培养液加胰酶前用PBS冲洗一下，可以让胰酶更好起作用

• Ao7 (2012-7-24 15:06:47)

  
  用加EDTA的胰酶消化,再离心一下.
  应该可以的.

• dotaaa (2012-7-24 15:07:17)

  
  我有两种方法你可以尝试一下：
  一.将细胞用生理盐水洗两遍，加入0.25%胰酶，放置5% CO2孵箱5-10分钟，然后再显微镜下观察，轻拍细胞，将已经消化的细胞吸除，在加入胰酶消化就可以了。
  二.就是先用生理盐水将细胞洗两遍，再加入生理盐水放置5% CO2孵箱5-10分，吸去生理盐水加入0.25%胰酶放置孵箱5-10分钟，就能消化下来了。

• windy+++ (2012-7-24 15:07:34)

  
  我的HK也是上皮细胞,联合EDTA 胰酶,消化好快,放0.8ml,几乎常温下放一分钟就变圆了.再冲几下就可以了.细胞消化得很好,一个个圆流溜的漂着,没贴壁的
  我以前消化的时候,细胞长得太密了,加1ml细胞立即成片的起来,肉眼都看得见.
  所以我的经验
  1. 80%左右就传
  2,加之前hanks液洗涤两遍,加消化液时尽量把hanks液倒干净.
  2.加了消化液后,瓶子放匀,平拿轻放.保证作用均匀.