[求助]ＭＴＴ出现问题

最新回复

• zhenxin (2012-7-24 15:32:44)

  QUOTE:

  原帖由 biabiade 于 2012-7-24 15:32 发表
  
  我做兔子的淋巴细胞转化实验（ＭＴＴ），
  培养４４小时后，加入ＭＴＴ，到４８小时时，每孔都变成黑色了，加了ＤＭＳＯ后成紫色．怎么会事，出了什么问题．大家帮帮忙，分析一下． ...

  可能细胞太多了。

• ending (2012-7-24 15:34:23)

  不多呀．１乘１０的６次方

• rxcc33 (2012-7-24 15:35:40)

  
  如果是96孔板，那就多了。

• qumm1985 (2012-7-24 15:36:03)

  
  全黑多半是因为污染了，污染后就是这个样子．

• whitesheep (2012-7-24 15:36:20)

  
  我把试剂又过滤了一遍，，又是这样，给点意见吧
  ＰＨ值对这有影响吗
  现在郁闷的要死

• dotaaa (2012-7-24 15:36:43)

  
  96孔板接种一般细胞数为10的4次方/孔。你种的数量是不是太大了。我也做过10的6次方，结果不太可靠。建议你种的细胞少一点。

• biabiade (2012-7-24 15:37:08)

  你以前也碰到过这种情况吗：培养４４小时后，加入ＭＴＴ，到４８小时时，每孔都变成黑色了，加了ＤＭＳＯ后成紫色．
  你是这样改进实验的，具体的方法？

• ero11 (2012-7-24 15:37:24)

  你尝试测定一下它的值了吗，它变黑的原因我也认为是细胞埋板数过多。，但是如果测定值有一定的趋势，也不是一定要废弃的阿。紫色是深紫色的了吗？

• biabiade (2012-7-24 15:38:41)

  不是深紫色，是有点黑．我也测国ＯＤ值．
  第一次：
  在４５０波长测的
  lps（２０）　　0.163  0.258  0.334
  lps（１５）　　0.195  0.329  0.415
  lps（１０）　　0.26  0.395  0.421
  lps（５）　　　0.291  0.423  0.421
  lps（２．５）　0.326  0.42  0.42
  对照（没加lps）0.358  0.414  0.4
  第二次：
  在５７０波长测的
  lps（２０）　　0.318  0.263  0.255  0.252
  lps（１５）　　0.286  0.302  0.294  0.3
  lps（１０）　　0.234  0.315  0.302  0.316
  lps（５）　　　0.333  0.304  0.333  0.341
  lps（２．５）　0.273  0.302  0.325  0.32
  对照（没加lps）0.289  0.288  0.346  0.307

• biabiade (2012-7-24 15:41:03)

  
  我是淋巴细胞，细胞数目不多呀．很多文献多是１乘１０的６次方 呀

• 33号 (2012-7-24 15:41:22)

  
  根据你提供的吸光值数据,细胞数不多,还少了.一般来说阴性孔的吸光值在0.7-1.2之间才合适的.
  出现上述情况的原因我认为有以下几点:
  1.细胞被污染了.以为用药组与不用药组的吸光值差别不大,而其中很小的差别很可能是你加样误差造成的,因为同浓度四个孔的吸光值标准差很大.
  2.你检查一下你MTT溶液的浓度配的是否合适.
  
  建议在实验的同一张96孔板上设定阳性对照药物,以考察你的实验方法是否存在问题.

• biabiade (2012-7-24 15:41:52)

  你能告诉我怎么设计阳性药物对照空吗
  １６４０的ＰＨ值高了也会影响ＭＴＴ变黑吗？
  我准备星期一再做，大家给点意见．
  我现在肯定的是我的１６４０的ＰＨ值偏高．
  兔子是耳缘静脉采血，会不会污染？

• qqq111 (2012-7-24 15:42:10)

  
  你最好镜检一下，看看你的细胞是否在MTT的作用下，被染成了紫色。如果你根本看不清细胞形态里面模糊一片，根据我的经验污染的可能性就相当大了

• xevin (2012-7-24 15:42:28)

  
  我见过这样的事情，你先不要急，很正常，你可以再试一次，不是MTT的问题，于细胞有很大关系，感染可能，培养基可能，下次就可能好了。

• biabiade (2012-7-24 15:42:47)

  在ＭＴＴ的作用后４小时，可以到到结晶，但是在显微镜下不是紫色的是黑的（也可能是显微镜滤光片的问题）．基本上可以看到细胞的形态．那怎么办．有好的意见吗

• biabiade (2012-7-24 15:43:10)

  培养基的ＰＨ值是很高．那这次培养，你有没有好的意见．我可以再改进一下