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[求助]请帮我分析以这几张图形
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请您帮我看看这三张图形，第一个图形（ck.001）是正常细胞的图形，第二张（ck pi.002）是正常细胞加了PI单染后的图形。第三张（48h 10.003）是加了10ppm药剂处理以后的图形，实验的目的是依据正常细胞的细胞膜完好，pi不能进入，而药剂处理以后可以使得细胞膜穿孔，pi可以进入，通过检测pi的荧光强度而得到不同浓度处理后药剂使得细胞膜通透性变化
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最新回复
toy (2012-7-24 16:37:13)
从图1、2看你的正常细胞PI染色荧光强度就很高了，有必要确认一下正常对照的细胞活力
wsll (2012-7-24 16:38:38)
chuntian1983 (2012-7-24 16:40:22)
我自己也是觉得正常 的不加pi 很明显细胞成为一团，但是加了pi
的正常的就有明显的脱尾，我调整电压 就是以 正常 的不加pi 的为标准，然后在这个电压 下跑其他的样，这样子对吗？
园丁## (2012-7-24 16:42:25)
我把图贴上来，方便大家看！这是第一张。
25001868.jpg
园丁## (2012-7-24 16:43:09)
第二张：
17981878.jpg
园丁## (2012-7-24 16:43:29)
第三张：
75299347.jpg
园丁## (2012-7-24 16:45:58)
问的原因是，一般我们都是用PI作为一种检测方式而在固定后加入，以检测DNA含量以及凋亡情况，根据目的，PI有破膜和不破膜两种。不破膜的主要是在检测凋亡的时候用，比如AnnexinV——PI法。检测DNA的时候，一般都在PI染液中加入了破膜剂，这样，PI可以进入细胞内对DNA进行染色从而得到
DNA的含量。
根据您的说法，我感觉您好像是是将PI加入细胞中一起培养看其通透性！如果是这样的话，PI对细胞是有毒性的，可能造成细胞的改变，具体会怎么样，我不知道。
如果不是这样，您做的就是普通的sub-G1法。那么检测结果最好用FL-2A来观测。您的图中由于FSC打得比较大，因此细胞都出现了一定程度的“尾巴”。
奇怪的是，您的第一张图和第二张图在FSC/SSC上区别很大，是同一批的细胞吗？怎么会有这么多的小体积低折光度的细胞出现呢？而且大部分看起来不像平时看到的碎片！
您的图里面正常细胞组也就是第一张图是没有加入PI的，是吧？从您的描速猜测，您想看PI对照组和药物组加入PI在流式上的区别，而标准是不加PI的第一张图。从结果看来，后两组没有明显得区别。93.78和97.34!
感觉您对PI染色的理解上有点偏差，或者是我理解错了。您如果想看细胞膜的通透性，那么就应该加入活染PI，比如没有破膜剂的PI或者DAPI。但从您的图来看，后两张用的都是破膜后PI然DNA的图，这样如何达到您想要的结果呢？您能从图上看到的仅仅是后两组DNA含量也就是周期的分布。您的M1代表的是PI阳性的细胞而已。
如果我说得是正确的话，您可以将您配制的PI中的Digitonin（好像是这个E文，记不清楚了，sorry）省略掉，这样PI染液中就没有破膜剂了，这样才能看通透性。或者您就直接用人家AnnexinV/PI试剂盒中的PI，它可以检测细胞“通透性”，正常viable细胞PI无法通过，apoptosis＆necrosis可以通过PI。
欢迎继续讨论！
66+77 (2012-7-24 16:46:18)
谢谢您，我的目的 是看药剂处理以后细胞的通透性，在药剂处理以后12小时，收集细胞，不加 破摸剂，然后加pi ,那么我的这三个图就是同一批细胞，不同的处理，应该正常viable细胞PI无法通过，加入药剂的那么细胞膜被破坏，PI进入。我是把正常的未加入PI的做为标准，调试机器的电压 ，同时把FL-2调出来，那么就是说，我在下来的测定中，正常的细胞即使加了PI，在FL-2上的荧光强度应该比较小，就是我标定的M1,我这个图形测定的不是很明显，我就是想跟您请教 ，我这样子标定图形，用M1这个尺度对否？还有就是我在调整图形的时候尤其正常的未加入PI的做为标准，应该 把FL-2 图形调整成我第一个图的样子，然后标定一个尺度，M1，这样子可不可？
66+77 (2012-7-24 16:46:38)
PI阳性的细胞，是我想表示的细胞膜被药物破坏，吸收pi,这一部分所占总体的百分率，我这个实验图形的设计可不可以？谢谢
园丁## (2012-7-24 16:47:00)
如果第二组是正常细胞加入没有破膜剂的PI，为什么会出现所有细胞基本呈阳性的结果呢？您的PI内含有破膜剂吧！
实际上只需要正常细胞加入不含破膜剂的PI作对照，划出M1即可！
whitesheep (2012-7-24 16:47:32)
我做过hochest/PI 的染色,这里的PI,当然是没有破膜剂的,荧光显微镜观察,细胞状态好的话,基本上不到 PI阳性细胞．所以我认为你的第二张图肯定有问题。
66+77 (2012-7-24 16:47:52)
我今天又做了一批数据，用的是试剂盒里面的PI,今天的药剂处理阳性细胞只有50%，谢谢大家的指点，说明我的方法是对的，就是用的PI出了问题，真的很感谢园丁##，多谢你们这些热心人
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