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[求助]钙荧光探针Fluo 3 AM的流式检测

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-7-24 17:04    作者: yonger    来源: 分析测试百科网

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本人用Fluo 3 AM来检测细胞内钙离子的情况,查了很多文献,大部分是用荧光分光光度计做的.我想知道流式怎么做,要不要测定Fmax与Fmin,还要分时间点测?最好能给我一点参考文献看看.谢谢.
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  • TAT (2012-7-24 17:04:54)


    你有没有查到一些相关资料啊.我需要流式做的,我看到的不是激光共聚交就是荧光分光.

  • yonger (2012-7-24 17:06:30)


    我也看了，只有大概的步骤，没有详细的；流式图谱，现在就是不知道调试出来的图谱能不能用 ，好象也是用直方图，不知道你现在测定了没有

  • yonger (2012-7-24 17:06:55)

    材料与方法
    材料:
    FLUO-3AM Sigma
    流式细胞仪COULTER®EPICS®XL 美国
    方法：
    1.细胞按所需处理后，弃培养瓶内所有的培养基，加入一些Hank's液洗一下倒掉。
    2.再加入一些胰酶溶液，覆盖瓶底即可，约1分钟后，弃胰酶。
    3.加入相应细胞培养液，用吸管吹打瓶壁，使细胞悬浮，计数,移至15ml离心管中。离心，弃上清。
    4.加入1ug的FLUO-3AM 后加PBS200ul，置37ºC水浴箱内45分钟。
    5.离心弃上清，用PBS洗三次，再加入少量PBS，过300目尼
    龙滤网。
    6.用流式细胞仪检测。

  • yonger (2012-7-24 17:09:01)


    关键就在于图形 是什么样子的，还有最后的分析

  • TAT (2012-7-24 17:09:48)


    我做过了，就是检测FL1-H,我能看到对照和模型荧光强度的变化，我不知道这样的结果是否可以了，我只要看能否有变化就可以了，不需要具体是多少浓度的Ca,可好多文献都是用公式计算出具体数字的，而且还要做一定时间内的荧光变化，我不知道我的处理能否被认可。我查了一些文章，只有五六年前的那种文章是以荧光变化来衡量的，后来的都是算具体浓度的。

  • yonger (2012-7-24 17:10:13)


    你能不能把你做的原始图形给我发几张, 我想看看你是怎么做的
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