[求助]加MTT前吸掉血清培养液是用枪由药物低浓度到高浓度...

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• toy (2012-7-25 11:20:05)

  不太清楚您的具体程序和要求，不过：
  1、一般来说加药的培养液不该含血清
  2、MTT直接加入到药物处理的培养液中，不要吸出原液。因为MTT作用过程，必须保证细胞的活性才有意义。
  3、MTT作用一段时间后，再吸出所有液体加DMSO。这时也不必要更换吸头，依次吸取就可以了，MTT转化的Formazan是沉淀，吸液顺序对它没有影响。有经验的话，直接对准水池甩板就可以，有时候效果比逐个吸取更好。

• KGZ564 (2012-7-25 11:20:36)

  QUOTE:

  原帖由 toy 于 2012-7-25 11:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不太清楚您的具体程序和要求，不过：
  1、一般来说加药的培养液不该含血清
  2、MTT直接加入到药物处理的培养液中，不要吸出原液。因为MTT作用过程，必须保证细胞的活性才有意义。
  3、MTT作用一段时间后，再吸出所有液体加DMSO。 ...

  我看到书上和众多战友的都是要吸出培养液的，要是你不吸出培养液那么Formazan应该会残留很多在培养液中造成很大的误差
  加药的培养液要是不含有血清会不会对细胞的生长造成很大的影响 ？？？
  
  我觉得还是要加血清，要吸去培养液甩板就可以了，方便快捷！！

• toy (2012-7-25 11:20:54)

  
  大家讨论讨论：
  1、Formazan应该是细胞线粒体氧化酶转化MTT形成的，因此应该产生在细胞内（所以要用DMSO溶解）。所以贴壁细胞就不存在Formazan悬浮于细胞液的问题了，悬浮细胞则需要离心后甩液。我觉得不应该吸出培养液后再加MTT，因为MTT转化必须是活细胞，去掉培养液后细胞对MTT的转化必然会受到影响，甚至渗透压、pH都难以保证。
  2、为了避免血清不影响药物的作用，所以推荐药物处理中不加血清。如果预实验证明药物和血清没有什么作用，那还是可以加的。至于对细胞的影响，可以通过设立对照组来解决。

• 大白菜 (2012-7-25 11:21:20)

  我看到书上和众多战友的都是要吸出培养液的，要是你不吸出培养液那么Formazan应该会残留很多在培养液中造成很大的误差
  加药的培养液要是不含有血清会不会对细胞的生长造成很大的影响 ？？？
  
  我觉得还是要加血清，要吸去培养液甩板就可以了，方便快捷！！
  
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  吸出培养液一般是在加药前，吸出后，再加含药但不含血清的培养液。
  为了防止血清对细胞的影响，可以在加药前，吸掉含血清的培养液后，更换无血清培养液，继续培养24小时，即饥饿细胞24小时，后再给细胞加药。

• pencil菲 (2012-7-25 11:21:43)

  
  恩 我用过含血清的培养基 对结果影响很大 一定要换成无血清的含药培养基
  怎么能吸出培养基 直接加mTT呢 每孔加20ul,如果没有培养基，这点液体连底面都难以埋没啊

• vcve (2012-7-25 11:22:03)

  
  可我的细胞最长要作用24小时
  加不含血清的培养基 细胞会不会饿死！？？？

• xyw5 (2012-7-25 11:22:24)

  
  吸出培养液一般是在加药前，吸出后，再加含药但不含血清的培养液。
  为了防止血清对细胞的影响，可以在加药前，吸掉含血清的培养液后，更换无血清培养液，继续培养24小时，即饥饿细胞24小时，后再给细胞加药。
  细胞饥饿是为了防止血清对细胞的影响？？多数情况下应该是为了让细胞同步化吧，加药时用不用血清，我觉得除非血清对你药检测的指标存在直接的干扰，否则，关系不大，有影响？？做个血清对照组啊，不就可以排除了？加MTT时要不要吸掉血清，与上面各位看法不同，我认为还是应该吸掉，因为加药干预经过一定时间后，各孔内液体量并不完全一样（如被蒸发），不吸掉，怎么保证MTT加的浓度一样？？还有，不吸掉，那你试验中药物作用时间肯定也得要充分考虑到，我个人认为，干预因素时间到点后，吸掉原培养基，换用含MTT、但不含干预药物、血清浓度和原来一样的培养基，就完全OK了

• BUK (2012-7-25 11:22:41)

  为了避免血清不影响药物的作用，所以推荐药物处理中不加血清。如果预实验证明药物和血清没有什么作用，那还是可以加的。至于对细胞的影响，可以通过设立对照组来解决。
  如果为了加药物就不要加血清的话，细胞在无血清的情况下，一般状态会变差，这样作出来的结果不会很理想的呀，我的就是这样的

• wsll (2012-7-25 11:22:58)

  
  血清培养基还是无雪清要看时间吧，我们做1天，2天，3天，用的是药物加血清培养基。如果无雪清，可能短时间还可以。
  
  加MTT前吸掉培养液，我们还用PBS洗两遍，然后加入不含血清的MTT培养液。

• junjie05 (2012-7-25 11:23:20)

  
  大家好!
  
  我做的是药物对细胞的增殖影响(MTT法),象这种试验,血清肯定会对细胞有增殖作用的(因为血清本来就是促进细胞生长的),那么我是不是要用含药物但不含血清的培养液培养呢? 或者直接设置一个10%血清对照组就可以了呢?是不是有可能血清对细胞的增殖作用掩盖了药物本身对细胞的增殖作用,从而导致试验结果阴性呢? 是不是也可以用更低浓度的血清如5%来做呢?