[求助]用胰酶-EDTA消化细胞后用离心吗?

最新回复

• redbutterfly (2012-7-25 17:25:36)

  
  不离心如何洗？

• one (2012-7-25 17:25:57)

  
  如果你的细胞贴壁性很好，在消化时间合适的情况下（即细胞可以在用pbs轻轻洗的情况下不掉下来，是可以的，然后加入带有血清的培养基来终止消化吹打就可以了。

• vera+ (2012-7-25 17:26:16)

  
  我自认为如果要求细胞状态比较好的话，最好离心，因为加入血清是不能中止EDTA消化的。，用EDTA消化需要彻底清洗，否则细胞容易脱壁的。

• summerxx (2012-7-25 17:26:33)

  1、终止消化，一定要加血清。
  2、如果胰酶中加有EDTA，就要离心。
  3、一定要注意，消化好后，收集到的上清液要及时中止消化。不要等全部收集好了，一起中止，这样很容易消化过渡。

• summerxx (2012-7-25 17:26:53)

  看看这个讨论，可能对你有些帮助：
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=6464808&sty=1')

• utt0989 (2012-7-25 17:27:09)

  本人接触细胞培养不久，请问EDTA的消化作用是什么原理？

• fklo83 (2012-7-25 17:27:26)

  一定要离心。参考司徒镇强的《细胞培养技术》

• chuntian1983 (2012-7-25 17:27:43)

  
  不用离心,因为EDTA的作用是解离鏊合作用的,同时加入7.4%的NaHCO3效果更好,胰酶的活性在加入含有胎牛血清的培养液就终止消化了.

• 气泡 (2012-7-25 17:28:00)

  
  我们有一株细胞是用EDTA和胰酶共消化的，消化后没有离心处理，直接加的DMEM，细胞生长也不错的

• tianmei001 (2012-7-25 17:28:17)

  好象是不用离心的呢

• baidukk (2012-7-25 17:28:35)

  
  应该是要离心的
  先用完全培养基终止反映
  然后离心
  再用PBS洗2遍
  然后在做

• tangxin_80 (2012-7-25 17:29:25)

  本人接触细胞培养不久，请问EDTA的消化作用是什么原理？
  
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  EDTA，乙二胺四乙酸，常用二钠盐。作为较强的金属螯合剂，可以将高价离子结合起来，比如钙镁。一般的胶原蛋白都需要有金属离子结合才可以发挥黏附作用，EDTA竞争结合这些二价离子，破坏黏附作用。但是一般来说EDTA只能使细胞层从瓶壁上剥离下来，并部分将细胞分散，所以不能单独使用EDTA。
  胰酶Trypsin即可以剥离细胞层，也可以分散细胞。与EDTA联合，不但可以发挥EDTA对细胞本身的作用，EDTA还可以稳定Trypsin，使之发挥更强的作用。（二价离子是Trypsin的抑制剂）

• newway (2012-7-25 17:29:46)

  养细胞到现在，个人认为不是很好，因为这样我造成细胞活力的下降，同时ＰＢＳ也对细胞有一定的影响，如果是贴壁细胞的话，影响情况将比较严重，贴壁困难还会造成细胞大量的死亡，同时还会稀释了培养液的一些成分浓度，这样对细胞有百害而无一利，所以应该先用培养基终止消化，在进行离心，然后接种到培养皿上，如果你想洗的话，可以在用ＰＢＳ重悬一次，在离心，去ＰＢＳ后加培养液接种也是可以的．

• zwsyrt (2012-7-25 17:30:03)

  
  如果消化时间过了，那就要离心了