[求助]请教有关MTT的问题两个，sos

最新回复

• 园丁## (2012-7-25 17:50:01)

  
  第一个问题论坛里讨论过好多次，自己搜。
  加入含有培养液的终浓度受试物能比较好的控制终浓度

• zwsyrt (2012-7-25 17:50:20)

  
  以不加细胞只加培养液的空作为对照孔，细胞加入MTT培养12小时后，小心吸除上清加150微升DMSO，震荡10分钟，酶标仪490nm波长侧OD值，这是我的做法，仅供参考

• junjie05 (2012-7-25 18:06:27)

  不加细胞只加培养液作为空白,还有一组是加入细胞和培养液不加任何处理作为对照,空白的目的是为了使实验数据标准化.
  自认为加入含培养液的终浓度比较好.

• bongte (2012-7-25 18:06:49)

  
  我们实验室都是直接加入不是终浓度的受试物。

• ending (2012-7-25 18:07:07)

  
  用培养液直接把药物稀释成你要的浓度，加板的时候就很方便，直接每孔加200微升就可以了 ，你的浓度越高，加样量越少，产生误差的可能就越大。
  我们都是把之前的培养液先吸出来，加入受试品。作用48-72小时，看你的需要，吸出培养液，加入新鲜培养液及MTT，培养4-5小时，检测就行了。

• 969 (2012-7-25 18:07:27)

  
  谢谢各位战友，这个波长的选择有什么经验没有吗？我看有的是490，有的是560，还有540的，究竟那个好些？

• nn255 (2012-7-25 18:07:49)

  
  检测的波长主要是检测兰紫色的吸光度，也就是甲瓒的颜色，应该在兰紫色的范围波长，490 ，570都有人用。

• 969 (2012-7-25 18:08:08)

  
  谢谢了各位战友，还有个问题，我做96孔板，药物用的DSMO溶解，量不大，需要做党课对照吗？

• 小野花 (2012-7-25 18:08:24)

  
  我们用只有培养基和培养基加细胞这两种空白对照；
  直接加入应该没问题吧

• 969 (2012-7-25 18:08:44)

  
  还有个问题想请教大侠，我是新手，所以问题很多。加了MTT后一定要在4小时左右测吸光度吗？可不可以等到明天啊（12小时后），或者加了DMSO后可不可以放超过12小时啊。因为今天是周末，老师不在，测不了，实验条件太差了，没有办法啊。请指教，谢谢！！

• glass (2012-7-25 18:09:02)

  悬浮细胞的话四个小时就可以测了，若是贴壁细胞或者是每孔的细胞数超过４＊１０Ｅ５　的话，就得过夜培养。

• eric930 (2012-7-25 18:09:19)

  我做的细胞是四小时测的，第一孔是对照，加的是六个副孔，副空可以自己定是几个，波长４９２，不过时间长点应该没问题的，这个时间主要是化学试剂与细胞分泌的物质发生化学作用的过程，时间长短无所谓，只要你每次测定的时间一致就可以

• summerxx (2012-7-25 18:09:39)

  
  加了MTT后可以延长到8小时再测，但不可过久。我曾经加MTT后过夜再测，结果所有的实验组颜色都变得一致起来，没有出现变化。

• mickeylin (2012-7-25 18:09:56)

  
  不加细胞只加培养液的空作为对照孔,即调零孔，细胞加入MTT培养3－5小时后，再加150微升10％SDS，震荡10分钟，酶标仪470nm波长侧OD值.