[求助]有关MTT

最新回复

• HP007 (2012-7-26 10:54:27)

  
  药物应该在接种后加，我当时用的是贴壁细胞，到细胞长到80％融合的时候假药

• am10 (2012-7-26 10:55:08)

  
  那是不是应该把药物浓度配大些,要不一加进去就稀释了,是吗?

• 49888 (2012-7-26 10:55:51)

  加药处理，看似简单，其实有很多细节。
  1.加药时机的选择。你要看你的药物主要作用在细胞周期的哪个环节。如果想看药物对细胞增殖的影响，那就在传代的同时加。如果，要看药物对细胞分化的影响，那就要等到细胞密度达到一定程度后，并且还要去血清化。如果要看药物对某种蛋白的表达或者修饰的影响，那你要查下这个蛋白主要在细胞周期的哪个阶段表达和修饰。
  2.药物处理时间的问题。主要参考别人的文献，如果没有相关文献，你可以做时间梯度。
  3.药物浓度的问题。也是参考别人的文献，如果没有相关文献，你可以做浓度梯度。具体操作，我们一般都是把药物配成母液（比如1000X），然后加到培养基，稀释相应的倍数（1000X的母液就要稀释1000倍。
  
  另外，建议你用CCK-8，很简单。

• 49888 (2012-7-26 10:56:09)

  
  一般讲做 MTT是要加入细胞培养 4小时后，再加入药物的。
  我最近在做MTT将步骤简单介绍如下，仅供参考：
  1，取对数生长期的细胞，每孔200llL,大约3000细胞加入96孔板
  2，培养4小时，吸弃培养基，加入药物180llL
  3，培养24，48，72小时，加入20llLMTT
  4, 培养4小时，离心，弃上清，加入dmso 150llL
  5, 震荡，测吸光度

• rxcc33 (2012-7-26 10:57:15)

  一般讲做 MTT是要加入细胞培养 4小时后，再加入药物的。
  我最近在做MTT将步骤简单介绍如下，仅供参考：
  1，取对数生长期的细胞，每孔200llL,大约3000细胞加入96孔板
  2，培养4小时，吸弃培养基，加入药物180llL
  3，培养24，48，72小时，加入20llLMTT
  4, 培养4小时，离心，弃上清，加入dmso 150llL
  5, 震荡，测吸光度
  
  培养细胞4小时就加药吗？那细胞可能还没贴壁呢

• star#room (2012-7-26 11:07:05)

  
  4小时时间短了点，最好过夜培养，第二天进行试验

• glass (2012-7-26 11:07:42)

  请浏览: http://www.dxy.cn/bbs/post/view? ... amp;tpg=1&age=0
  
  如有专业上的的问题可以PM我, 很高兴一起探讨.

• qumm1985 (2012-7-26 11:11:08)

  我以前做过药物敏感试验，浅谈自己的一些看法：
  1.在铺细胞24h后加入药物，细胞一般12－24小时贴壁，确保实验可靠，24h后一般细胞都贴壁了，此时加药处理比较合适。
  此处有一个问题，如果同时铺的时候加药，个人认为不能排除药物抑制细胞黏附进而抑制细胞贴壁的情况，所以具体还要看实验目的了。
  2.细胞做药物试验一般是要试浓度，根据文献如果没有文献根据临床血药浓度，倍比稀释。
  3.药物实验也要试时间，浓度试出来以后，放不同的时间点，做MTT，观察药物的时间依赖效应
  如果楼主有时间精力可以时间浓度一起试，多铺几个96孔板，一个板子一个浓度梯度，不同板子不同时间做mtt，就是时间梯度，综合结果，可以得出药物作用的最佳时间和浓度
  另外提一句，现在国外文献试药物作用用平板克隆抑制实验，希望楼主有时间看看相关文献。