[求助]将原代细胞分离成单个细胞用那种酶好？

最新回复

• misswu61 (2012-7-27 15:25:57)

  胶原酶应该不错。

• moonlight45 (2012-7-27 15:26:21)

  
  应该买那个公司的呢？浓度为多少？

• moonlight45 (2012-7-27 15:29:20)

  
  我要消化原代肝细胞,所用的胶原酶的浓度和消化时间是多少?请指教

• loli (2012-7-27 15:29:38)

  
  I型胶原酶（Sigma 300u/mg，用含5mmol/L Ca2+的无镁PBS溶解，浓度0.025%）,5~10min。

• loli (2012-7-27 15:30:15)

  
  0.05%的Ⅳ型胶原酶（Gibco），消化时间要视具体情况而定。一般至肝脏变软，压之凹陷不易恢复。

• moonlight45 (2012-7-27 15:30:41)

  
  请问楼上几位，你们用的是灌注法吗？我想直接用胶原酶消化，可以吗？

• loli (2012-7-27 15:31:29)

  
  当然可以直接用胶原酶消化，我用的sigma胶原酶IA，消化浓度为1mg/ml,两外你还有胰蛋白酶是么，可以结合胶原酶消化，先用胶原酶消化再用胰蛋白酶，时间也是具体情况而定了，与温度有关。

• cj_mondy (2012-7-27 15:31:45)

  用胰蛋白酶消化时是不是要不含钙镁离子的buffer啊？

• loli (2012-7-27 15:33:23)

  
  一般来说想把细胞消化成单个，都需要用不含钙镁离子的buffer，呵呵。因为Ca+，Mg+有"凝聚"细胞作用。

• 小螺号 (2012-7-27 15:34:13)

  
  请问： 做胰腺原代培养用什么酶消化好呢？

• HP007 (2012-7-27 15:34:31)

  对了 胶原酶D和胶原酶IV是不是一样啊 ？那个公司的好一些啊 ？准备定试剂了

• HP007 (2012-7-27 15:34:55)

  我也想做鱼的原代肝细胞培养，现在正在看资料，想向你学习学习！有没有什么protocol分享一下，我想用胶原蛋白酶消化，不知怎么样？
  x谢谢

• windy+++ (2012-7-27 15:35:21)

  
  我觉得用EDTA和胰蛋白酶联合消化会比较好，因为EDTA的作用就是解除细胞间的连接，但是EDTA的作用不能用血清终止，有可能会导致消化的细胞贴壁困难，最好离心以更好的去除。不过我用的觉得还可以，你可以试一下。