[求助]细胞污染

最新回复

• idea2011 (2012-7-27 18:02:19)

  
  你的培养基是刚配好就马上过滤的吗？
  我认为是培养基的问题，有可能是过滤没起作用，混入了细菌，
  建议你把培养瓶泡好酸，洗干净，121度灭菌，配制培养基的器皿也要泡酸洗净，并保证过滤的过程尽快完成，否则细菌的热原是无法过滤掉的，
  配制时最好也在超净台里，这样才能搞清楚到底是什么环节引起的污染

• IAM007 (2012-7-27 18:02:38)

  
  培养基是配好马上就滤的。不过我们每次滤的时间都很长，滤1L得用将近3个小时。我们用2层0.22μ的滤膜，用真空泵抽滤到抽滤瓶中，然后分装。今天上午九点多将一瓶两周前滤好，从未用过的培养基放在孵箱中检菌，瓶盖没有拧紧，下午一点多看时，瓶壁上就可以看到白色，可流动的异物了。

• whitesheep (2012-7-27 18:03:03)

  看似培养基的问题啊。
  我个人觉得你们过滤的时间太长，因为超净台只是相对无菌的环境，长时间敞口不仅可能污染细菌或真菌，也会升高PH值对细胞培养不利。
  其次要保证盛滤好的培养液的容器是无菌的。
  培养箱也是一个污染源，如果有一瓶细胞发生污染，别的很可能传染上，尤其是真菌。碰到这种情况我们一般把该培养箱里所有的细胞都扔掉，彻底消毒之后再养细胞。

• wu11998866 (2012-7-27 18:03:20)

  肯定是培养液的问题呀。
  应该是过滤过程造成的污染。建议用大的滤器，有500ml一次性的，滤1000ml没问题的，两次即可完成。
  好像你用的是抽滤瓶，一般做细胞培养滤培养基没有用这个的，都是用钢制的滤器或一次性的塑料滤器.
  另外，你抽滤过程中用的抽滤瓶、滤膜等消毒彻底吗。
  过滤时间长也是一个问题。

• yychen (2012-7-27 18:03:41)

  
  建议：一、最好在培养基内加双抗100U/mL，得现加，能起到一定的作用。二、一般用一层虑纸就行，两层可能还不好，过滤慢，还容易漏。滤纸最好用进口的，PALL的就不错，国产的有的不行，滤纸一定要光面向未过滤的一边。三、超净台做一下菌落计数，估计落菌了，最好能用甲醛熏蒸一下。如果要消毒孵箱最好用90度干烘3个小时以上，能起到很好的效果，不过要注意有的二氧化碳感应器只能耐温70度，要看看孵箱情况。

• wu11998866 (2012-7-27 18:03:58)

  
  可能是培养基的问题，特别是你在过滤时，你可以两层滤纸用不一样孔径的，比如上面的是0.45下面的是0.22，这样既可以保证过滤的速度又可以保证过滤的清洁度。

• 911 (2012-7-27 18:04:24)

  
  我们也遇到过类似的情况,不知楼主你们实验室超净台的滤膜多久没清洗或更换了,如果时间长了的话建议BOSS把超净台上的滤膜换掉或清洗.

• zhenxin (2012-7-27 18:04:50)

  最近实验室的细胞接二连三污染。多次用新洁尔灭、酒精擦孵箱，超净台，并紫外照射都无济于事。上周五将两瓶培养基（不同时间配制的，其中一瓶加了10％FBS）放在孵箱中检菌，今天早晨发现两瓶都长菌了。在显微镜下看是很小的，密密麻麻可移动的东西，和污染的细胞中看到的情况一样。其中一瓶培养基从瓶壁上就可以看到一层白色流动的沙状物。打开瓶盖可闻到两瓶中都有异味，但味道有区别。放在孵箱中时，两瓶都是拧紧了瓶盖的，不知这种情况是说明孵箱有问题，还是培养基本身有问题？拧紧瓶盖的情况下，如孵箱有问题也可影响瓶内的培养基吗？
  实验受到很大影响，望有经验的同学给些建议，非常感谢！
  
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  我最近也是经常碰到"在显微镜下看是很小的，密密麻麻可移动的东西，和污染的细胞中看到的情况一样。"这个问题,我自己把培养基跟血清分开培养,看下到底是什么出了问题,结果总是血清污染了,而且再过滤也是无济于事,建议你污染了你就不要再用,扔了.原因我想不是过滤的问题,主要是存放跟使用过程可能你操作不小心,血清碰到了瓶盖!!!!!
  另外,我今天换液是也出现这个问题,我马上把液体再换掉,用培养基冲洗几遍,然后再加可靠的培养基跟血清,至今快12个小时,有几个孔板是保住了,而且细胞继续生长(我养的成纤维细胞).只要你的细胞不是那么娇贵,在遇到这种情况时,你可以死马当活马医,活了就保住了,如果还是污染也没有损失.
  还有,你的培养箱里边的水,你摸下是不是粘的,如果是的话,培养箱就已经污染了,要重新消毒.不然,你的细胞会继续被污染的.

• IAM007 (2012-7-27 18:05:21)

  
  谢谢各位的建议。我们的超净台用了很多年，从未换过滤膜，可以想象肯定非常脏，我们会马上更换。我们的问题在于不是我一个人的细胞或培养基污染。我们有两个人做细胞实验，而且操作很小心仔细，但是近来我们的不同细胞，不同批次的培养基都遇到了问题。
  请问z ，用甲醛熏蒸毒性很大吧？具体如何操作？
  用什么东西可以将孵箱90度干烘3个小时以上？
  我养的是原代肝细胞，分离后本应3小时左右即可贴壁，但是现在几乎不贴壁了，根本保不住……
  我们孵箱里原来放的是硫酸铜饱和溶液，清理时里面似乎漂着异物。近来有三种不同的细胞先后污染，唯独hepG2.2.15一直没事，也让人觉得很奇怪，似乎不是孵箱的问题

• owanaka (2012-7-27 18:05:42)

  
  应该是你的培养基有问题，另外，你用的应该负压滤器的话，相对正压得也是容易污染的。