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[求助]细胞室惨遭污染，如何彻底灭菌
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细胞培养室的通风装置一直有故障，所以排风不畅，室内的空气不断变
污浊，最近天气变热，微生物也开始活跃了，传代的一批细胞中，至少有一
半在不到一天的时间内，培养液就变黄了，相差10倍物镜下可看到杆状的快速游动的黑色微生物，多者是密密麻麻地充满了整个培养液，翻腾滚动，十分恐怖的景象，据此判断应该是细菌污染了？
找人修好了排风装置，并用5%硫酸铜溶液充分擦洗培养箱，酒精喷雾
灼烧后，整个细胞室用乳酸熏蒸了一夜，最后又用紫外灯照射培养箱12小时。本以为这样灭菌够彻底了，谁知昨天一接种细胞，几瓶又全污染了，
不到一天的工夫，培养液全变黄了，那些黑色游动的家伙又来了。
难道培养箱无法彻底灭干净？培养基及其他操作器皿都换新的。
各位老手有何高招？
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最新回复
xueyouzhang (2012-7-30 12:49:11)
要想彻底灭菌，只有用甲醛熏蒸。
windy+++ (2012-7-30 12:51:33)
再次还有污染的话,培养箱最好还是甲醛熏蒸吧.
bgf5 (2012-7-30 12:51:55)
看来还不得不用甲醛了，由于细胞室空间狭小，做细胞培养的同学又多，考虑到甲醛的毒性及其熏蒸后残留的时间问题，一直都不用这一招。
最后请教一下甲醛熏蒸安全一点的具体 操作方法，望不吝赐教：）
milkdog (2012-7-30 12:52:14)
所有的所有全部扔掉，除了实验仪器外！
彻底甲醛熏蒸
严格消毒
重新开始
其实这样最省时间和精力
zsxan1990 (2012-7-30 12:52:38)
确定是细胞培养室污染吗？培养液和血清检菌了吗？会不会是培养液或血清染菌呢？
Ao7 (2012-7-30 12:52:55)
需要确认一下是否培养液、血清等培养用液是否也被污染，测试方法：可在培养板中加入少量培养液及培养液和血清的混合物，培养一两天观察有无污染。
sunnyB (2012-7-30 12:53:13)
首先要确定是培养箱的问题再甲醛熏蒸把。建议把细胞的培养基取出单独培养测试一下。如果确认没有问题，再甲醛熏蒸。
如果是细胞房熏蒸的话一般是按照体积来进行熏蒸的。
每立方米加甲醛80ml,高锰酸钾40g。2：1的比例，先放入高锰酸钾，再加甲醛，一定要快速。因为甲醛遇高锰酸钾会产生强烈的氧化反应，溅出来，有点危险。密闭最好24-48h使整个细胞房及空调排放系统等都得到熏蒸。然后彻底的排风使甲醛排放出去，因为甲醛是致癌物，在确保细胞房内没有甲醛的刺激性气味后实验人员才能进入。单纯熏蒸细胞培养箱的话可以根据容积计算用量。
千万注意甲醛对呼吸道眼粘膜等都会有很大的损伤，所以操作的时候一定要小心。我们实验室就有人因为急着做实验甲醛没散尽就进去了，结果嗓子眼睛第二天都发炎了，好长时间才好。恐怖亚。
utt0989 (2012-7-30 12:53:30)
杆状的快速游动的黑色微生物，多者是密密麻麻地充满了整个培养液，翻腾滚动
你的应该不是细菌污染，好像在那个帖子里看到过说是黑焦虫
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