[求助]内皮细胞如何传代

最新回复

• zhenxin (2012-7-31 10:17:19)

  
  你好，我们最近也在做内皮细胞培养，我做的是胸主动脉的，但没有成功，能否告知您做原代的培养方法，谢谢！

• wu11998866 (2012-7-31 10:17:37)

  
  胸主动脉的内皮细胞很难培养，还是好好去查资料吧。

• bohe221 (2012-7-31 10:27:42)

  
  不加EDTA，用0.05%的胰酶，待细胞都漂起来再收，然后离心。

• fei1226com (2012-7-31 10:28:12)

  
  最好不要加EDTA，EDTA影响细胞的贴壁，用它的话要用pbs漂洗，因为它不像胰酶可以被血清中和，所以建议你仅用0.25％即可，在镜下看见细胞变圆，细胞间空隙加大即可倒掉胰酶，加入培养剂用滴管吹打下来，然后分瓶。

• 小野花 (2012-7-31 10:29:08)

  大家好!
  我最近做大鼠血管内皮细胞,传代了好几次,都没有存活,传代的第一天,有好些细胞贴壁了,但到了第二天,细胞就都漂起来了,我想请教前辈:内皮细胞应该用那种酶消化,多大的浓度,多长时间,是否加EDTA,那浓度又是多少.我用的是胰酶,0.25%和0.125%的都用过,还加了0.02%EDTA,消化了3-6分钟,我现在很着急,希望谁知道能帮帮我,非常感谢!!!
  
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  我们一直都是使用0.25％的自己用胰酶粉配制的不含酚红的胰酶液，同时是不含有EDTA。为什么不含有EDTA好呢，还是和其他战友说的一样，便于使用全陪来中止消化。至于0.25％的胰酶液的使用量是多少呢？我的经验是：对于我们常规使用的50ml的培养瓶是一吸管（约1.2ml），但是注意的是你的加胰酶的时候一定要从非瓶底那面加入，然后轻轻放平培养瓶，接着就可以直接倒掉胰酶液了，使得残留的液体消化。随后可以在显微镜下观察细胞的消化情况，接着用全培中止消化便可。倒掉全培，再加入全培，便可吹打细胞了。我的经验是这样的消化，都不会使得细胞都浪费掉。
  希望对你有用。

• chuntian1983 (2012-7-31 10:29:30)

  
  我用的是0.25%trypsin,
  1,1XPBS wash
  2,500ul 0.25%trypsin to 100mm plate,37C,2min
  弱弱的问一句楼主，你用的培养液适合内皮细胞吗？

• yychen (2012-7-31 10:29:50)

  
  谢谢大家!
  我用的培养液是高糖DMEM,我查过资料的,适合内皮细胞生长的,我想问一下,需要加生长因子吗? 我用的血清是中美合资生产的.

• DDD (2012-7-31 10:30:13)

  
  我用的是low glucose DMEM.
  additionally 1% L-glutamine, 1% P/S and 10% FBS.我的内皮细胞源于小鼠胸主动脉。

• yychen (2012-7-31 10:30:29)

  
  请问: 我用贴壁法培养的内皮细胞,里面混有其他细胞,你有同样的结果吗?
  你的培养液里加生长因子吗? 你作鉴定吗?我正准备做CD31,培养液里加了　　２０% FBS．

• junhun (2012-7-31 10:31:05)

  
  我在养人的血管内皮细胞，细胞和培养液、消化液和终止液都是进口的，但可能由于细胞运输的问题，活力不好，细胞总不爱长，痛苦啊！我消化时是镜下观察，而后直接加中止液，200g,7min离心出去消化液和终止液，再用全培重悬细胞，效果还行。消化液有EDTA。共同交流吧，