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[求助]细胞污染谁之过
我的课题是做单抗的,所以得先养细胞,导师先后三次从中科院上海细胞研究所邮购SK细胞,但都难能逃脱污染之害啊,而且三次污染完全相似,每次拿到细胞后镜下观察,密度适中,形态良好,都已贴壁,然后第二天就进行传代处理,可第三天观察,就见液体发黄,浑浊,镜下可见细菌已长满瓶底,虽然细胞仍贴壁,但状态已明显下降,每次我都把原装的培养液培养一下，发现培养液本身就污染了，有了前两次的失败，我已经害怕了，所以第三次,我将所有需要用的器皿都从新仔细清洗消毒,培养液、胰蛋白酶、血清全部换新的，可结果一如前往，为了找到原因，我按照这个培养条件培养另一种细胞，细胞长的很好，实验还的继续，可我该怎么办呢，还该不该从这再买细胞呢，不知各外战友有没有这样的经历呢，让我们一起来分析一下。谢谢大家。[求助]细胞污染谁之过
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最新回复
jujuba (2012-7-31 13:51:44)
会不会买来的细胞就被污染了？
wu11998866 (2012-7-31 13:51:59)
lagua123 (2012-7-31 13:52:16)
很有可能是操作问题，或者培养箱等培养环境已经污染，建议直接用空白培养基放在培养环境中培养，或者作个不加细胞的对照，如果依然染菌，那就肯定不是细胞株的问题了。象lz那样已经用另一细胞株做过对照了的话，还是考虑买其它公司的吧，毕竟实验的时间也是耽误不起的。
白白的 (2012-7-31 13:52:32)
可能是系统污染的缘故,我也跟你一样,养了两个月了,还是过不了污染这一关.或许可以叫别人跟你同做,就当作对照组,以排除操作之可能.
wanglaoshi (2012-7-31 13:52:48)
SK 细胞比较难养，你确信是细菌污染吗？还是没有满足培养条件（比如血清质量）?
pengke1983 (2012-7-31 13:53:04)
我的一个朋友也碰过这种情况，前3次买的细胞都污染了，后来第4次再让上海发细胞时，他们让我同学自己去取。建议你去武汉的细胞典藏中心或协和的细胞中心重新买来试试，但要重新复习一下操作过程，不能排除操作过程造成的污染，可请有经验的老师先协助试验性培养。
wanglaoshi (2012-7-31 13:53:23)
感谢大家的留言,我导师说过一句话,说会怪的怪自己,不会怪的怪别人,所以我一直在找自己的原因,第二次买回细胞后,我就找了一个我们科养细胞比较有经验的老师帮我处理,可结果同前一次一样,处理后的第二天就污染了,时间耽误不起不说,我的经费已远远超资了,不知沈阳或大连的朋友有没有养SK细胞的,我愿拿我所有的细胞株交换.谢谢.
wanglaoshi (2012-7-31 13:53:57)
肯定是细菌污染,血清是15%的BS,而且最后一次我是用他原装的培养液
乌贼老弟 (2012-7-31 13:54:50)
我觉得你购买的时候别人应该是给你邮寄的养好的细胞吧？
要是原因是种子的问题的话，他们就不能养到铺满瓶，
所以我觉得还是要在你自己和你的实验室找找原因；
建议：
1.暂时停止实验，彻底打扫实验室，实验室的所有物品完全消毒；
2.所有的培养基丢弃或者重新过滤（包括血清）；
3.做完以上两步之后你可以用空的瓶子装上你即将要用的培养基
孵几天，看有没有污染发生；
如果孵几天后都没有污染，那么可以继续你的实验了，
操作的时候要倍加小心；
好运！！！
gemei0115 (2012-7-31 13:55:22)
你确实应该从头到尾的思考了,仔细消毒.换倒所以的东西可以先用别人的来试,如果还污染就是你个人的问题了
star#room (2012-7-31 13:55:39)
我觉得应该不会是操作的事情．你的培养基每次新用的时候要先用空白培养基培养至少３天以上，无污染，再进行细胞培养．我觉得你应该和上海细胞所那边沟通一下．很可能就是那边出了问题．下次再买细胞的时候，提前检测自己的培养基等试剂．然后同时做空白培养基对照，买的细胞培养基对照，自己实验室已有细胞培养对照，这样就可以确定是哪个环节出了问题
wanglaoshi (2012-7-31 13:55:56)
谢谢大家,我除了亲自去买细胞,再找不出更好的办法了
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