[求助]MTT实验

最新回复

• yysr238 (2012-7-31 17:07:29)

  
  1.需要把培养板中原有的培养液吸弃后再加此溶液，否则会影响吸光值。
  2.吸的话会弄掉部分细胞，所以你可以轻轻的甩掉液体。

• dotaaa (2012-7-31 17:07:46)

  
  还是有点不明白，我是看加药物以后对细胞生长的影响，如果不吸掉培养液的话，即使对吸光值有影响，那对各个组的影响都是一样的，最终各组比较的结果还是不变的吧；如果吸掉培养液，那空白组的也要吸掉了，最后调零就是用的detergent reagent了？

• Ao7 (2012-7-31 17:08:12)

  
  原理就是胞内的酶代谢MTT生成有色物质，所以培养液要吸掉，然后用DMSO来溶解，全部溶了再去比色。

• flower-201 (2012-7-31 17:10:40)

  
  吸的时候把下面的细胞弄掉了怎么办？？那么多孔不可能保证每个孔都不碰到细胞吧，那样不是误差更大？？费解

• shenkunjie (2012-7-31 17:10:54)

  有平板离心机吗，可以甩板，去掉上清！

• 2541 (2012-7-31 17:11:10)

  
  呵呵，谢谢大家，我只是觉得如果不去上清可以不影响各组之间的比较的话，那就可以减少一项干扰因素，对最终结果是不是更好？

• 小鱼鱼 (2012-7-31 17:11:28)

  
  如用平板的话，离心速度是多少？时间？我转了一次，下面没看到多少细胞，我用的是1000r/min,10min.

• leifengta (2012-7-31 17:11:53)

  
  悬浮细胞一般1000r/min,10min就可以呀，光肉眼看是不行的。离心后，轻轻甩出液体，加入DMSO，用酶联免疫测测，本底数值正常的话，应该没问题。贴壁细胞一甩，加DMSO就OK。

• owanaka (2012-7-31 17:13:05)

  
  请问可否用手甩呢，然后把板子翻过来放在干净纱布上轻轻拍，直至拍干孔内液体？

• xue258 (2012-7-31 17:14:06)

  
  若没有平板离心机 96孔板中的悬浮细胞该怎么离心去上清呢？我们的微量加样器只能插一个枪头 每孔依次吸出放管里离心 太麻烦 谁来出个主意？

• idea2011 (2012-7-31 17:14:28)

  
  做MTT要求培养液中的血清浓度最好不要高于10％，由于我平时培养细胞用的是20％，担心降低血清浓度对细胞状态不利，请问可不可以最后加MTT溶液的时候再换成低浓度或无血清的培养液呢？谢谢

• dotaaa (2012-7-31 17:15:42)

  加入MTT反应几小时后,
  我认为培养板中原有的培养液不用完全吸弃，比如培养板里有200ul培养液，可以只吸弃150ul，然后加入detergent reagent,振荡等甲肷完全融后,再测光吸收值.

• tianmei001 (2012-7-31 17:16:00)

  
  可以在最后加MTT的时候换成无血清的培养液，我们就是这么做的

• S6044 (2012-7-31 17:16:21)

  
  悬浮细胞一般1000r/min,10min就可以呀，光肉眼看是不行的。离心后，轻轻甩出液体，加入DMSO，用酶联免疫测测，本底数值正常的话，应该没问题。贴壁细胞一甩，加DMSO就OK。
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  我一般用的是1000r/5min .可以吗？另外。请问leg1234.离心后怎么把上清轻轻的甩出，我每次都是用枪头一个一个孔吸的，有时还是会吸出细胞的，不知道有没有更好的操作方法，谢谢！

• moonlight45 (2012-7-31 17:16:42)

  
  弱弱的问一句：空白对照组是什么？是只加培养液的培养皿吗？

• yueban-1147 (2012-7-31 17:18:18)

  
  那到底调零孔怎么加？

• vera+ (2012-7-31 17:18:34)

  
  我想问一下，我的细胞在一个特殊的培养瓶里干预，想干预后马上测MTT，于是把细胞酶消化后接种到96孔板，那应该有什么方法可以不经过一定的时间贴壁，马上测MTT呢？

• pencil菲 (2012-7-31 17:18:49)

  用针筒吸会不会减小一点吸到细胞的可能性
  让针头的孔贴着侧壁吸

• langlang (2012-7-31 17:19:55)

  
  我培养贴壁细胞,是用枪把培养液吸出来再加DMSO的.
  但是刚刚听说,隔壁的实验室一直是直接用手把板里的培养液甩干的.

• baidukk (2012-7-31 17:20:28)

  
  MTT?有细胞毒性的啊？用手甩干？要甩多久？还要避光！