[求助]293细胞培养消化到什么程度为好?

最新回复

• yes4 (2012-8-01 12:56:11)

  
  我一般会在消化之后把消化液吸出来
  所以看到细胞伪足收缩即停止消化，用培养液将细胞吹打散
  293挺皮实的，多吹几下没关系

• tianmei001 (2012-8-01 12:56:27)

  
  293细胞贴壁不是特别牢固，很容易消化，加入胰酶后消化一小会就够了，看到细胞层疏松或者显微镜观察细胞变形即可马上弃掉消化液，轻轻拍打细胞就下来了。

• moonlight45 (2012-8-01 12:57:34)

  
  293细胞贴壁不牢，我传代时用胶头滴管吹打3分钟，镜下观察细胞基本都已经脱落，然后就可以传代了。

• vcve (2012-8-01 12:57:59)

  
  如果在10cm培养皿中加了1ml胰酶消化，待细胞变圆以后直接加培养基可以吗？会不会对细胞的生长有不好的影响？因为我的细胞一直贴壁不紧，用PBS一洗就会掉下来；转染18小时后发现连未用DNA转染的细胞有一部分少年生长奇怪，整体颜色很暗，师兄说可能是cell lysis，但是他也不肯定。我现在很着急，因为293细胞用GFP转染（磷酸钙法）没有成功。

• tianmei001 (2012-8-01 12:58:19)

  
  293细胞很好消化，你所说的1ml胰酶消化用量太高了，10cm培养皿0.5ml胰酶足以，细胞消化时间的掌握并不像书上说的那么严格与恐怖，我曾经一次消化近20个培养皿或瓶，时间掌握没那么准，但结果并无大碍，你所说情况可能与胰酶用量稍高有关，建议减少用量。此外，养293时细胞密度能否尽量均匀也将影响其生长状态，所以消化时的吹打功夫还是蛮重要的！GFP转染（磷酸钙法）是否转染效率太低了？建议用腺病毒转染，毕竟293还是腺病毒的地道包装细胞啊！

• 831226 (2012-8-01 12:58:38)

  
  转染效率与细胞状态有很大关系
  状态比较好的293用钙转一般效率都能到80%以上的

• 小鱼鱼 (2012-8-01 12:58:55)

  
  我的293细胞怎么跟大家的不一样？昨天传代0.25%胰酶消化了5分钟以上，拍拍也不掉。掉也是一大块一大块的掉，然后任凭怎么吹也吹不散了。今天看培养瓶壁上就是一个一个的白点。愁死我了，这个样子怎么转染呢？是否是：1用胰酶加EDTA消化好？2 是否我的细胞状态已经太差没法恢复了？
  兄弟姐妹帮帮忙请！

• glass (2012-8-01 12:59:12)

  
  肯定是没有吹打成单个的时候就传代或冻存了，以前我们实验室也有人出现这样的情况。这样，你先在胰酶里吹打，确定完全成单个后在加有血清培养液中和，然后离心。这样虽然细胞会有损伤，但能活下来的以后状态应该不错。等细胞状态稳定后再次传代时切忌不要在孵箱中消化，室温不到1分钟细胞变园时就中止消化，立即吹打50下，这样消化下的细胞都是单个，状态很好！

• 小鱼鱼 (2012-8-01 13:01:41)

  
  我用0.05%的胰酶+PH7.2PBS就加到刚能盖到细胞为止，北到30秒就能看到细胞像小细沙一样从瓶底掉下来，很好消化。

• 大尾巴 (2012-8-01 13:02:02)

  
  试一试下面的消化液，百try千爽^_^
  
  5 g KCl
  2.2 g Na Citrate
  
  上面准确称量后，定容500ml dH2O，高压蒸汽灭菌，4度存。
  具体配量自己按比例调整。
  使用方法：T25cm2为例，将293细胞培养基倒掉后，加1-2ml CS液洗一遍细胞，加约1ml CS消化液，37度或室温，根据不同实验室293细胞的状态，可自己调整消化时间，使用该CS消化液的优点之一就是，基本不用担心副作用，因为我们经常直接消化后直接接种到新鲜的培养瓶中，而不用洗掉CS消化液。
  good luck！
  
  补充: 293细胞比较脆弱，所以避免用胰酶/EDTA类消化，这样有利于进一步转染等操作。