[求助]Ｈela细胞的消化

最新回复

• xevin (2012-8-01 13:22:42)

  
  很好消的啊，怎么会不好消化啊？如果你的胰酶配制没什么问题的话，你是拿什么配的胰酶啊？一般我们都用pbs或者hanks液配，主要就是没有钙镁离子就行，如果不太理想可以放在37度温箱里几分钟就消化好了。只要消化好了就很容易吹下来了。。

• zranqi_1 (2012-8-01 13:23:03)

  
  从瓶上消化不下来原因应该是没有消化好，或者是夷梅不行，或者是消化时间不够，最终导致消化程度不够
  判断消化程度，可以镜下观察，以看到细胞变圆为准，但是这个指证开始培养是比较难掌握的，还有一个判断方法就是拿起细胞培养瓶，晃动一下，要是看到细胞碎片跟着晃动，表示消化合适，就应该中止消化
  消化好，吹打均匀以后，单层细胞就没有问题了。

• kulee (2012-8-01 13:23:25)

  
  我在消化Hela 细胞的时候，遇到消化下细胞团，不是单个细胞。如果用枪头吹打是不是会对细胞有损伤呢？怎样消化才能得到单个细胞？

• jrwyyplt (2012-8-01 13:23:55)

  
  na那说明你消化的不够充分啊！我们也是用枪头吹的，只是动作要轻柔，为了避免吹打对细胞的损伤所以一定要消化好一点，否则你强行把细胞吹下来，肯定会造成损伤，而且也容易出现很多细胞团。。细胞变园，细胞间连接基本消失就可以，多操作几次就有经验了

• 小螺号 (2012-8-01 13:24:16)

  
  非常感谢大家的帮助,我消化的时候用同样的胰酶消化其他的细胞都没问题,很好消化,而消化Hela就不行.延长了消化时间7-8分钟,看细胞也变圆了,但还是吹不下来,真郁闷!

• 小螺号 (2012-8-01 13:25:08)

  
  再请教一个问题,消化Hela必需要加EDTA吗?谢谢!

• pencil菲 (2012-8-01 13:25:23)

  
  并非必须加EDTA,我养的Hela就不用加EDTA,而且加了EDTA对细胞有毒性,但是若消化不好也可加上EDTA试一试,这样可减少过度吹打造成的损害.根据情况而定,

• kulee (2012-8-01 13:25:39)

  
  胰酶配制好后Ph必须调整到8.0左右，否则消化就很困难，你调了吗

• sunnyB (2012-8-01 13:25:59)

  胰酶配制好后Ph必须调整到8.0左右，否则消化就很困难，你调了吗
  
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  书上不是说胰酶的浓度7.2时消化能力最强吗？

• ffooll (2012-8-01 13:26:19)

  
  并非必须加EDTA,我养的Hela就不用加EDTA,而且加了EDTA对细胞有毒性,但是若消化不好也可加上EDTA试一试,这样可减少过度吹打造成的损害.根据情况而定,
  
  真的不能对细胞吹打过度吗？我昨天为了让细胞充分分散成单个，吹打得很厉害。今天细胞死了四瓶，我正在找是什么原因。会跟我的吹打过度有关吗。因为我听一位养过HELA的前辈说，吹打过度也没有关系，有时候不还把瓶子拿起来摇呢。死了的细胞今天都没有贴壁，会是因为我吹打过度吗。
  
  但是我用0.25%的胰酶，里面还含有EDTA消化时到是没出现什么问题。一般可以较快的消化好。只是昨天消化时有一瓶消化比较慢，放同样的量，后加的都已经消化好了，但前面加的一瓶却没有好。