[求助]外周血单个核细胞

最新回复

• zsxan1990 (2012-8-01 13:27:21)

  1ml全血一般情况下能提取外周血单个核细胞5-7×　105，外周血单个核细胞是悬浮生长。外周血单个核细胞作MTT试验每孔要求细胞数是4×　105?作流式要求细胞数是10×　105?

• cj_mondy (2012-8-01 13:27:41)

  
  单核细胞是贴壁生长的，应用淋巴细胞分离液分离，置入六孔板培养，2小时后，去悬浮，贴壁的为单核细胞。
  1ml血里，单核细胞不是很多，这也跟你分离的技术有关。
  MTT看你观察几天了，一般为1X10的4，这是我做药敏的细胞浓度。
  送流式标准1X10的5，细胞越多，越准确，上样也快。少点1X10的4，原理也能做，但是上样时间太长。

• 吴才子 (2012-8-01 13:27:58)

  
  多谢大家的解答！我也刚了解到，一般每毫升健康人全血可分离到1-2X10的6个单个核细胞。外周血单个核细胞包括包括淋巴细胞、单核细胞、各阶段的粒细胞（早幼粒、中幼粒、晚幼粒、杆状核）。单核细胞是贴壁的，而淋巴细胞是悬浮生长的，不知各阶段的粒细胞（早幼粒、中幼粒、晚幼粒、杆状核）是何方式省长？
  我要取病人血标本提取外周血单个核细胞作试验。通过MTT在不同时间不同药物浓度下找最佳抑制时间和药物剂量，然后还要通过流式测凋亡，最后还要测凋亡相关蛋白，我初步计算了一下，细胞数可能不够。病人血标本的获得又是间断的，很头痛。
  不知外周血单个核细胞的增殖情况怎样，培养难易其增殖周期，因为我每取一份标本就要培养一次。

• 吴才子 (2012-8-01 13:28:23)

  
  有那位培养过外周血单个核细胞否？外周血单个核细胞的增殖能力如何？

• 66小飞侠 (2012-8-01 13:28:41)

  
  我培养单核细胞是用来诱导DC的，不明白你说的这个增殖力是用来做什么实验？

• 吴才子 (2012-8-01 13:29:02)

  取白血病人血标本提取外周血单个核细胞，测其中受体。重组细胞因子不同时间不同浓度加入其中通过MTT测细胞抑制率，流式做凋亡，之后再测凋亡相关蛋白或基因表达，探讨凋亡机制。估计细胞数不够，不知是不是需要让增殖后再作

• yueban-1147 (2012-8-01 13:29:24)

  有那位培养过外周血单个核细胞否？外周血单个核细胞的增殖能力如何？
  
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  培养外周血单个核细胞可用1640培养基含10%胎牛血清，同时要加入IL－2，如果想让细胞增殖得多一些，还可加入PHA。IL－2终浓度为50U/ml，PHA终浓度为20ug/ml，PHA只需加入一次，但IL－2每次换液后都要补加。

• tieshazhang (2012-8-01 13:30:23)

  
  我的试验与你相似，进展也不太好，但有了一点初步结果，希望与你共商。

• tieshazhang (2012-8-01 13:31:21)

  
  嗨！你好！试验做得怎样了？我也是目前在做白血病细胞的调亡和增殖试验的，做MTT，流式，测相关指标。比较麻烦，因为白血病的分型多，标本也不好得。今开刚得了一个急淋的血，培养上明天做。我的手机号13061236012，可短信联系！我在青岛，你在哪？