[求助]原代心肌细胞的培养状态不好的原因是什么呀？

最新回复

• wsll (2012-8-01 14:54:36)

  我做了多次这个了，其中也出现过这种情况，一般来说，是酶消化过度或者离心后没去除完全，或者有轻微污染，你先多培养几天试试

• qumm1985 (2012-8-01 14:56:00)

  
  实在贴壁效果不好的话，可以试试用鼠尾胶原包被培养瓶或培养板

• ending (2012-8-01 14:56:25)

  
  我现在也在做这个 和你的情况差不多
  我认为消化是一个很关键的问题，不知道你是用什么来消化的？

• dotaaa (2012-8-01 14:56:46)

  
  刚刚开始养的时候也出现过这种情况，后来作出一些调整，感觉好一点，至少可以保证成活，连成大片并且搏动，可以到10天以上，再长就没有试过了，不过我的实验至多养到第5天。
  
  我也觉得消化是其中的关键。我采用多次消化法，个人认为是必须的，通常消化4～5次，500～800rpm离心，所用胰酶终浓度为0.125%，EDTA0.01%。至于活细胞少，和用的乳鼠数量有关系吗？只做10来只的时候确实没有很多细胞，我一般做30只以上，也有做50只的时候，选用3日内乳鼠。

• 3648755 (2012-8-01 14:57:04)

  想请教一个问题 你讲的 连成大片的样子可以具体的描述一下吗？
  我分的是胚胎的心肌细胞，可见搏动的 用的是24孔板，但是每一个空里面也十几个搏动的单个细胞 你的细胞是什么样子啊？

• vera+ (2012-8-01 14:57:41)

  
  1.消化可能过度,一般8分钟就可以了,还有就是胰酶浓度过大了.
  2.选用的培养瓶或培养皿贴壁效果不好,选用一次性的培养皿试试.
  3.老鼠数太少,导致细胞数太少,接种面积又过大,导致细胞脱落.
  4.接种到24-wells培养板时,细胞混悬液没有吹匀,叠起的细胞太多,导致板子没有种匀,细胞长的不好.
  5.细胞数没有达到规定的数

• flyxx05 (2012-8-01 14:58:04)

  
  谢谢大家，我使用的是二型胶原酶消化的，明胶包被，而且老板说细胞很脆弱，要避免离心。很头疼的事情

• zranqi_1 (2012-8-01 14:58:19)

  和我的情况差不多啊 我想养的干净些 为后续的实验做基础

• sunnyB (2012-8-01 14:58:38)

  
  我第一次培养的心肌细胞状态很好，跳了十二天，第十三天的时候污染了，还在跳，但后来做的几次就不行了，消化时总是有粘液样的东西，我没办法离心得到细胞，不知楼上的高手有什么好的建议能避免粘液样东西的出现呀？谢谢。下面是我第一次培养的心肌细胞

  
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