[求助]细胞被污染了怎么抢救啊

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• zsxan1990 (2012-8-02 14:55:52)

  这样不行。可以按以下的方法处理试试：
  1、用PBS配制100倍浓度的双抗（P.S），也既青霉素和链霉素各一只溶于80-100ml的PBS中，获得100倍浓度的双抗。
  2、收集已经污染的细胞（15ml离心管），离心，细胞沉淀用上述100倍的双抗重悬浮，洗涤1次。
  3、细胞沉淀再用4ml 100倍的双抗悬浮，37度作用4h。
  4、离心，弃上清，细胞沉淀用完全培养基再悬浮，接种于新的无菌培养瓶中。并加入平时3-4倍的双抗培养，观察。
  有时，经过上诉的方法处理的污染细胞可以拯救过来，这通常是污染不很严重的情况下可以。若是严重的污染，恐怕就只有将细胞丢弃了。看你的运气了。祝您顺利！

• eric930 (2012-8-02 14:56:09)

  
  这位同道之人，我前两天也遇到同样的情况啊，所有细胞都污染了，提高双抗浓度好象没什么太大效果，只能眼睁睁全丢了，最好还是自己平时多注意点，增强无菌操作意识。但也祝你好运希望你能把你的细胞救回来。

• wmp1234 (2012-8-02 14:56:36)

  
  细胞被污染的确是一件很让人头疼的事,不过也不是无药可救.首先我建议你找有经验的老师或师兄师姐看看是什么污染,如果确定是哪种污染就可以对症下药了.如果看不出来,先用十倍的双抗冲击24-48小时,还不行,可采用我们实验室一位同学的做法,他是学临床的,用了一点临床上用的头孢注射液,再把培养液中血清的浓度升高,可升高到15%-20%,后来他细胞中的污染就没有了,细胞还长的狂快!

• zhenxin (2012-8-02 14:57:02)

  上面写的配制100倍浓度的双抗,青霉素和链霉素各1支,能不能详细说明一支的浓度是多少,万分感谢

• one (2012-8-02 14:57:33)

  上面写的配制100倍浓度的双抗,青霉素和链霉素各1支,能不能详细说明一支的浓度是多少,万分感谢
  100倍浓度的双抗的配制方法为：
  P.S（100X）： PG 1.0×106 IU，SM 1 g，加入灭菌生理盐水至100ml（或PG 0.8×106 IU，SM 0.8g，加入生理盐水至80ml），分装，于-20ºC保存。
  其中由于青霉素的每支包装为0.8X106 IU，而链霉素每支的包装为1.0g，所以按照PG 0.8×106 IU，SM 0.8g，加入生理盐水至80ml来配制双抗得到的浓度最为准确，但实际使用中没有那么的严格，也即青霉素和链霉素个一支溶于100ml无菌PBS即可。建议用PBS来配制双抗，这样的话，无论使用多大的双抗量都是等渗状态，这样的好处不言而欲。

• rxcc33 (2012-8-02 14:58:01)

  同意楼上的观点，最好先确认是什么污染？ 如果是真菌就用两性霉素B，100u/ml。

• 8s5g (2012-8-02 14:58:33)

  
  多谢各位的热心帮助！
  我正用oceanzt的方法实验，看看效果怎么样吧。

• DDD (2012-8-02 14:59:07)

  
  有次我的细胞里面长了杆菌，因为细胞蛮重要，只能挽救．先用ＰＢＳ洗２遍，消化，离心，重悬，传代后用１０倍双抗冲击２４小时，之后重复上述过程一次，竟然给挽救回来了，只是细胞状态下降了不少，但好在培养几天后似乎是完全恢复了