[求助]3T3L1前脂肪细胞分化问题

最新回复

• remenb (2012-8-02 15:11:47)

  
  1.随着分化的进行,细胞形状也从成纤维细胞形逐渐变成近圆形和圆形。现在认为细胞形态的变化是分化过程中必须经历的一步,而不仅仅是脂类积累的结果。比如,设法阻断脂肪酸的合成,使脂类积累不能实现,仍可以观察到3T32L1 前脂肪细胞经历形态学上的变化,因此细胞形态的变化也是脂肪细胞分化的早期标记之一。
  2.你的诱导培养基没什么问题.
  3.细胞要后形态边化后很容易脱落.要求操作的时候小心操作.
  4.这是我收集信息后总结的诱导方法.但我不是做这种细胞的.希望有点作用.
  1.  以细胞浓度为104/ml接种于放有小盖玻片的24孔板中，接种21个孔。诱导前传代的细胞在接种时数量不要太大。
  2.  用完全培养基培养，2~3天换液1次，直到细胞完全融合铺满。
  3.  继续用完全培养基培养2天，细胞进入接触抑制，退出生长周期。
  4.  小心吸掉原有培养基，加入诱导培养基培养2天。加入前要摇匀培养基。中间不换液。诱导后IBMX作用下细胞会收缩变圆。
  可考虑半量换液。
  加分化液后的第2天起，培养液中可能开始出现大量的悬浮细胞，每次换液时悬浮的细胞丢失。
  促分化第一天培养基是变的很黄，因为细胞的代谢比较旺盛，这个时候不需要换液，加诱导剂两天以后换液（10%FBS＋insulin）。
  5.  诱导2天后小心吸掉诱导培养基，用只含有胰岛素的培养基培养2天，中间不换液。
  要注意换液时吸液体和加液体要轻缓，细胞容易脱壁，此时细胞开始分化贴壁不牢。细胞会重新变为梭形。
  6.  小心吸掉培养基，换为完全培养基培养4天，中间换1次液。诱导后的第四天可能出现脂肪滴。
  7.  诱导开始后第8天开始可以做染色。染色方法见下面。

• fqswdzd (2012-8-02 15:12:05)

  
  恩，谢谢了。我还以为那样细胞就死了呢 ，看来不让它脱落还是有一定难度的，我再去试试看。

• fqswdzd (2012-8-02 15:12:32)

  还有一点还不是太明白:
  为什么要在培养板里用小盖玻片培养cell呢? 是便于生长贴壁还是因为这样可以重复利用培养板呢?

• rxcc33 (2012-8-02 15:13:04)

  
  哦，不是这样，打算做爬片染色的话就这样，每天都取几个片子拿出来染色。当然直接在板子上也可以染色，但染了后板子就不能继续养细胞了，用旧的板子，每板养一次的观察孔数也可以。

• rxcc33 (2012-8-02 15:13:44)

  
  一波未平一波又起！
  今天发现接种了细胞的24孔板孔中细胞生长的都不均匀，孔中央的细胞密度大，边缘的密度小。记得开始接种的时候是把细胞吹匀了的，不知道会不会是我的培养板本身的问题呢？？

• zwsyrt (2012-8-02 15:14:03)

  
  我也在做，前两天在诱导时，也出现分化两天细胞死亡的现象。我养了4块24块板，有一块基本全死了，有两块很好。非常谢谢rmwdxy9的资料。我还有点建议是细胞是4*10（4）合适点。
  向各位在请教下，知道哪边有胰岛细胞HIT-T15或βTC-6啊？

• fqswdzd (2012-8-02 15:14:25)

  
  请问楼上的战友，你培养的也3T3L1吗？你培养死的那一块是不是真的死了，还是不贴壁而脱落了呢？
  我的这种情况好解决吗，严不严重阿？

• sunnyB (2012-8-02 15:15:06)

  
  " 诱导剂是10mg/L INSULIN，0.5mMDEX，0.5mM IBMX加10%胎牛血清DMEM培养基"
  但是 我看到的文献用的DEX基本都是用的1.0μmol/L. 估计你是打字的失误吧?