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[求助]为什么细胞生长的不均匀？
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细胞生长的不均匀，对于培养的细胞不利。当有的地方细胞还很稀疏的时候，有的地方细胞已很密集。传代吧，太早。不传代吧，密集生长的细胞会相互堆积，细胞形态会发生改变，而且会促使细胞往自己不希望的方向分化。真是很难。希望广大群友讨论改善的方法。
下图是我曾经养的MSC,原代接种的时候细胞悬液已经打匀，接种后，镜下也均匀，但是细胞长着长着就不均匀了。
如图所示，整个右边细胞很密集，而且已看不出MSC的梭形，而左下角细胞还很稀疏。
另外这张图上，我还有一个问题，左上角有个细胞团块样结构，细胞围绕中间的物质呈放射状排列，这个不应该是所谓的细胞克隆生长群。但是细胞长到一定时候会有不少这样的现象，此照片我只截取了一个。希望高手解释一下。
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最新回复
plaa (2012-8-02 15:47:23)
细胞培养中，本来就会有一些聚集的趋势，原理和细菌的培养中出现菌落很像！
因为，我们培养的细胞也有生长优势的差别，那些生长快的细胞就会有较多的细胞，因为它分裂的比较快，子代就比较多！
但我看了你的图不是这个原因，你的细胞可能就有自己有聚集生长的趋势！
对于你那种的细胞，培养是要改变一下方法，这是我的个人经验！
你加培养基的时候，第一要混合要充分。第二，也是最关键，你的培养基要比平时少加一部分！
你试试吧，效果会很好！
伊莎贝拉 (2012-8-02 15:48:19)
xevin (2012-8-02 15:48:42)
你试试吧，效果会很好！
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请问，培养基少加一部分是指血清少加，还是整个DMEM的总量少加？
我的原代培养是每个培养瓶5ml（DMEM-L＋20％FBS），培养瓶是50ml，底面积25CM2。
wood533 (2012-8-02 15:49:29)
使用良好的培养器皿,细胞悬液要混匀,不能转着混匀细胞.尽量是单细胞悬液.
dog002 (2012-8-02 15:50:30)
我们的细胞和你的不同，但也遇到过同样的问题，我们的经验是很可能培养瓶底不平，换个瓶子试试。
c86v (2012-8-02 15:50:47)
细胞系有肿瘤化的趋势，跟我们实验室里的细胞系这两年的表现差不过。
viviwang1987 (2012-8-02 15:51:07)
1), the cells were not seeded evenly.
2), not all cells have the same proliferative potential. Some of them may have shorter doubling time than others.
3), Only those cells that have stem cell characteristics can grow indifinitely. In other wwords, only those stem cell - like cells can be passaged again and again.
831226 (2012-8-02 15:52:10)
我个人认为有以下几个原因：
１．在消化过程中，没有消化完全
２．在吹吸过程中，没有把细胞冲散均匀
３．细胞瓶没有放平
lagua123 (2012-8-02 15:52:52)
我培养的MCF-7细胞也出现过这样的情况，主要是培养瓶底部比较密集
这个原因主要是吹打时候没有均匀，另外还有一个原因，可能培养箱本来就不平，细胞沉淀下去时比较集中
充分吹打后，接种时十字摇晃一下，这个问题就可以解决了
要是多孔培养板，比如九十六孔，可以采取分两次加细胞悬液，原因我也不明白，效果倒是挺好的，铺板明显比一次性加完的均匀。
mamamiya (2012-8-02 15:53:09)
我们也遇到过这种情况，在接种到新培养瓶，加培养液后也吹打数次，另外刚接种后尽量放平也比较关键。
am10 (2012-8-02 15:55:06)
这位兄弟的照片比我的好多了，我养的神经前体细胞，有的地方长的是一团一团的，有的部位只有零星的几个，每次接种的时候都很分散，真是很郁闷啊。
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