[求助]细胞复苏后再传代不贴壁是什么原因?

最新回复

• 阿k (2012-8-03 15:21:07)

  
  培养液最好用冻存前用过的。再传代后细胞就不贴壁可能是细胞不在增殖的高峰期就传代

• ending (2012-8-03 15:22:21)

  
  怎么传代的阿？是不是消化时间太长，损伤了细胞哦？

• vera+ (2012-8-03 15:22:46)

  我也发现过这样的问题 但是我这冻存没问题 问题可能出现在冻存的存放期间比如液氮减少等

• HP007 (2012-8-03 15:23:20)

  
  1 冻存时，细胞数是不是不多？
  2 复苏时，你一冻存管传了几瓶，最好先传一瓶
  3 消化时，时间不要过长

• 3648755 (2012-8-03 15:24:12)

  
  谢谢各位的热心帮助,我年前冻存的细胞能传代,但是过年回来再复苏细胞就不能传代了,消化时间,培养基都和年前一样,我也找不出什么原因,请大家多帮忙,多谢了

• remenb (2012-8-03 15:25:53)

  
  在此补充两句：细胞冻存其实要涉及到诸多问题，但如果你能尽可能规划操作，应该不会出现这种情况。首先是冻存时间的选择，选择细胞生长状态旺盛期，这一时期并不总是以细胞生长融合度衡量，一般60-80%融合度为最佳，但你也应该重视此时细胞真正生长状态的好坏，如细胞是否饱满，形态是否改变，要力求选择生长状态最佳的细胞进行冻存。其次，冻存与复苏时的准备工作是否充分，如是否符合慢冻速溶的操作，甘油与血清、培基比例是否得当，根据本人经验，书中所规划的比例有时并不能适合每一种细胞，或者说对有些细胞并不是最佳的方案，你可以尝试加大血清比例的做法。此外加完甘油后是否仔细混匀也不容忽视，不混匀等同于没加~！复苏时一定快速，最好提前预热培养基，并保证一定的细胞密度。细胞冻存实际很简单，可能是你养细胞时间较短，建议多向其他人学习请教！很快你会成功的！

• summerxx (2012-8-03 15:26:10)

  
  长得很慢？
  后来还是长“满了”？
  
  还是觉得差不多了，所以传代？

• 3648755 (2012-8-03 15:26:35)

  
  多谢大家的帮助! 细胞刚复苏状态还可以,但是长的不如冻存前快,我觉得可能是细胞刚复苏活力不怎么强的原因吧,长几天后来我发现细胞有60-70%的样子就不怎么长了,所以就传代了.主要的问题是不能传代,一经消化传代后细胞就不贴壁了,用的方法和以前是一样的,消化时间,培养基等什么条件都没改变,就是不能传代,我已经复苏五六瓶了,每瓶都是一样的情况,是不是细胞本身状态的问题还是冻存的问题?请大家指点

• plaa (2012-8-03 15:28:09)

  
  在多问两个问题，1. 楼主培养的细胞是永生化的细胞系还是自己经原代培养扩增的细胞，如果是后者，细胞的活力就会差，经不起冻存复苏这样的折腾，尤其是正常的细胞。
  2. 楼主用的培养瓶是否刷干净了，细胞比较珍贵，建议换塑料的培养瓶。

• ending (2012-8-03 15:28:32)

  
  冻存时细胞的状态？一定要旺盛。
  
  复苏时细胞的浓度如何？细胞数太少？
  
  我也遇到了同样的问题，但是我的是永生细胞。我的培基是年前培的，是冷藏没有冷冻。我换了冷冻的，并稍微加大了一点血清浓度，细胞就飞快的长了 。建议稍加大血清浓度试试，复苏后可能活力弱，切不可消化过渡！时间宜短不宜长。
  
  还有楼上说的，培养瓶是否有问题？ 培养箱条件？同等条件下其余其他的细胞呢？
  
  注意每个细节，你一定会成功！

• yapuyapu (2012-8-03 15:28:51)

  
  我怀疑你的细胞在冷冻的时候污染了,解冻后细胞密度大,微生物生长相对生长缓慢,等传代的时候,细胞密度变小,微生物开始疯长,建议你继续培养一天,看是否微生物生长很明显?