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【分享】高效液相色谱法检测真菌毒素
内容摘要：高效液相色谱法(HPLC)是目前一种极为普及的真菌毒素的检测方法。真菌毒素分析时要综合考虑流动相、色谱柱、柱温和检测器等分析条件，找出最佳配比。某些自身产生荧光的真菌毒素如OTA和麦角碱，可直接用配有荧光检测器的HPLC分析，而其他一些分子中不含发色基团(如伏马菌素)或本身可产生荧光但强度较弱(如AFBl和AFGl)的毒素进行HPLc分析时，需经柱前或柱后衍生、改变流动相条件(如使用离子对试剂、改变流动相pH等)以增强荧光信号方能定量检测。【分享】高效液相色谱法检测真菌毒素
高效液相色谱法(HPLC)测定真菌毒素是20世纪70年代中期发展起来的，随着色谱柱填充材料化学的发展以及仪器的改进，分析的灵敏度和重现性均大大得到改善。目前，HPLC已成为一种极为普及的真菌毒素的检测方法。
由于真菌毒素性质不同，加上分析条件之间相互影响、相互制约，为达到理想的分离效果，分析时要综合考虑流动相、色谱柱、柱温和检测器等分析条件，找出最佳配比。某些自身产生荧光的真菌毒素如OTA和麦角碱，可直接用配有荧光检测器的HPLC分析，而其他一些分子中不含发色基团(如伏马菌素)或本身可产生荧光但强度较弱(如AFBl和AFGl)的毒素进行HPLc分析时，需经柱前或柱后衍生、改变流动相条件(如使用离子对试剂、改变流动相pH等)以增强荧光信号方能定量检测。
用于增强AFBl和AFGl荧光强度的试剂包括柱前衍生剂三氟乙酸(tr小luoroaceticacid，TFA)、亚硫酸氢钠和柱后衍生剂口一环状糊精及一些光化学衍生剂。净化后的样品提取液经 TFA柱前衍生后，用RP—HPLC配有荧光检测器分析AFs一直是过去十年最常用且简单的方法。但由于AFBl和AFGl经TFA柱前衍生形成的衍生物 AFB2。和AFG2。性质不稳定，并且分析过程额外增加了一步反应，加大了操作误差，因此TFA柱前衍生近来逐渐被碘、溴溶液及电化学柱后衍生技术所取代。
虽然碘溶液柱后衍生检测AFs的方法已被AOAc采纳，但由于存在衍生剂对色谱系统的腐蚀破坏、碘溶液不稳定需现用现配增加工作量等一系列问题，现许多实验室以溴溶液(如溴氢化吡啶嗡)或电化学法产生的溴代替碘溶液，进行柱后在线衍生检测玉米、花生、干果中的AFBl和尿中的AFBl、AFB2、 AFGl、AFG2、AFMl和AFQl。电化学衍生装置是利用电化学原理，以在线产生的溴为衍生剂，具有操作简便、易于安装维护、无需控制反应温度和流速比例、免去每日制备饱和碘溶液等优点，与柱前衍生方法相比，极大地提高了分析灵敏度，但缺点是衍生所需装置昂贵，不适于广泛推广。
用配有荧光检测器的RP—HPLC系统定量检测玉米中的伏马菌素时，亦需先对毒素进行衍生化，邻苯二甲双醛/2一巯基乙醇是最常用的对伏马菌素B，和B2及相关化合物分子中的氨基进行柱前衍生化的试剂。其他可用的衍生剂包括：4-氟-7-硝基苯呋喃、萘四磺酸一2，3一dicarboxaldehyde/氰化钾和荧光胺等。B类单端孢霉烯族化合物(如 DON)本身也不产生荧光，但分子中C一8位置上有酮基，虽不能用HPLc配荧光检测器检测，但可配紫外检测器检测。离子对试剂可用于检测某些酸性真菌毒素如OTA、桔青霉素、镰刀菌素、交链孢菌酮酸和一些碱性麦角肽碱等。
AOAc官方方法中HPLc法被用于检测食品中的黄曲霉毒素Bl、M1和伏马菌素。比较多的国家用该法检测谷物中的OTA、ZEN、DON、展青霉素、链格孢毒素等。
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