[求助]细胞培养

最新回复

• dragonkilly (2012-8-07 15:18:45)

  
  看看PH值是不是太高了

• ending (2012-8-07 15:20:00)

  
  大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)

• guagua (2012-8-07 15:21:04)

  
  我来说说我的看法，你应该从以下几个方面去找问题：
  1 先弄清楚你复苏的细胞在冻存之前用的是什么培养基，最好与原来的品种保持一致。
  2 确定培养用的瓶子处理得当，包括泡酸时间要够，冲洗次数，过双蒸、三蒸，灭菌、拷干。如果处理不好，会影响细胞的贴壁。
  3 所用的培养液加没加血清和双抗。一般要求含10%小牛或胎牛血清，还要滤过除菌。血清可为细胞生长提供必要的养分，促进分裂、增殖等等，没有血清成分的培养液是养不好细胞的。市售的培养液一般不加血清和双抗，要自己加。
  4 查一下这种细胞最适宜用哪种培养基。
  5 消化时间是不是太长了，使细胞受到损伤。一般用胰酶消化只需2-5分钟。
  6 真菌的感染在镜下是看不到的，培养液也不容易变混，但是细胞的状态就是不好。
  认真查找一下，我看第三点的可能比较大。
  祝你好运！

• rxcc33 (2012-8-07 15:21:51)

  
  我猜如果不容易复苏或者是复苏以后也长的不是很好，容易很快就死掉，会不会是不是细胞冻存的太久的缘故，有些细胞本身就只能传代一定的数量，再加上冻存和解冻对细胞来说，总会有损伤，要不楼主换一些冻存时间不太久的细胞试试。当然还可能是培养基的PH的问题。个人意见，仅供参考。

• lixi559 (2012-8-07 15:22:11)

  楼上说的挺详细了，另外你可以检查一下你的培养箱，看看是不是饱和湿度；另外，你是用超低温冰箱冻存的还是液氮啊？一般超低温冰箱是不能保存太久的，三个月左右吧，如果时间太久，细胞存活率很低、状态也不好啊。培养细胞不能嫌麻烦，自己多总结多尝试，找到原因所在相信你很快就能把细胞养好啊！

• skytree (2012-8-07 15:22:32)

  
  细胞复苏后能长满，看来不是细胞冻存的问题，如果冻存得不好，复苏后，细胞长的非常慢，镜下的四细胞很多。如果消化后用的培养基和复苏时用的一样，基本也可以排除培养基的问题，考虑漂洗液或者胰酶的问题，培养瓶的问题也不能排除，如果玻璃培养瓶没洗干净的话，很容易出现这种现象，也有可能是操作手法的问题。

• KGZ564 (2012-8-07 15:22:56)

  同意楼上的观点，是不是消化时的操作有问题，胰酶浓度过高或者吹打的太剧烈了？有些细胞对温度比较敏感，是不是在室温操作时间过长？

• mimili_901 (2012-8-07 15:25:14)

  
  大家好，谢谢大家提出的宝贵意见，我昨天测了一下培养基的ＰＨ为７.７　可是同学说培养时二氧化碳进去以后ＰＨ值会下降的　，不用管它，我是买来的培养基，调ＰＨ值不好调啊　，另外我漂洗的时候用的ＰＢＳ是含钙镁的　对肝癌细胞有影响？ＰＨ值对肿瘤细胞是不是影响很大啊？　　谢谢各位

• pengke1983 (2012-8-07 15:29:38)

  
  可能问题就出在这儿，胰酶消化时是不能有钙镁离子的，钙镁离子会抑制胰酶的作用，楼主消化细胞时是否时间很长，因为消化的效果差，用力吹打，其结果是细胞不是被消化下来的，而是从培养瓶上撕下来的，这样的细胞就正如楼主描述那样，复苏后长得很快，但一消化就完了。楼主不妨用不含钙镁离子的pbs洗涤，问题可能就解决了。

• wu11998866 (2012-8-07 15:30:08)

  
  ＳＭＭＣ－７７２１应该是比较好养的一株细胞。首先细胞死亡不是培养基的问题，因为是传代以后才死的；很可能是你使用的消化液有问题，我实验室样养的7721都是用不含钙镁离子的胰酶消化，消化时间一般2-5分钟，用D-Hanks洗涤，细胞状态一直挺好。

• wsll (2012-8-07 15:32:03)

  
  我们实验室也养 ＳＭＭＣ－７７２１，老手养的时候没有任何问题，换人后细胞状态就不好了，也会大量死掉，所有试剂都是一样的，也会这样，个人觉得可能是操作方面的问题

• Ao7 (2012-8-07 15:32:26)

  
  补充两点：
  1、培养基的PH值没有问题，因为一般的培养基都是有缓冲体系的，7.7不是问题，你的细胞也没有那么精贵的，扛的住；胰酶PH值测过吗？曾经有一次我配胰酶时候没有加缓冲液，最后细胞给酸死了；
  2、培养基是不是加多了，以六孔板为例，每个孔2ml就够了，多了无益反而有害；
  用你的激酶消化一下别的细胞试一下，很可能就是这个原因了。

• ffooll (2012-8-07 15:38:54)

  
  以上说的都挺有道理,我觉得会不会是支原体感染,支原体感染时培养液是透明的不浑浊,但细胞会慢慢的死掉,死细胞就会悬浮起来.

• xevin (2012-8-07 15:39:20)

  
  昨天复苏的细胞，今天看贴壁的好少啊，换了液不知明天如何。。。是不是要再等2～3天再换液啊，还是每天换一次啊。。。

• 04906 (2012-8-07 15:39:36)

  
  我也出现了类似的情况，我用一次性培养頩复苏，培养液用的是DEME，复苏后的PANC-1细胞，2天左右后，贴壁，状态很好，形态也很好。我就用漂洗液清洗（当中没有吹打），再加入培养液，镜下观察，还有很多细胞贴壁。可是到了第二天，细胞就都漂了，变成了圆的亮点了。我已经复苏了，好几次，都出现了这个问题。换别人的漂洗液，同样会出现这个问题。
  望高手指点，急需，谢谢

• guagua (2012-8-07 15:41:48)

  
  还要提醒你一点,就是温箱的实际温度,你要亲自用温度计测量一下,我有个师姐就是因为温箱的实际温度不对,细胞总死.希望能对你有帮助.