[求助]溶液配制

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想在培养细胞中添加以下因子,不知道如何准确配制:FSH,睾酮,insulin,Ve
Vc,retinol(Va),BSA,trandferrin,testosterone,retinoic acid.请各位站友帮忙提供准确的方法。哪怕是其中一种也好,谢谢了。
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  • loli (2012-8-07 15:48:23)


    1.过滤有机溶剂需要使用耐DMSO的Nelon聚四氟乙烯过滤膜材料滤膜
    乙醇浓度不要超过千分之一,对照组也要加入同样浓度乙醇。乙醇溶剂(0.25%)有促进脂肪沉积的作用。DMSO终浓度传说不要超过0.1%。
    当量浓度(N) 溶液的浓度用1升溶液中所含溶质的克当量数来表示的叫当量浓度,用符号N表示。 例如,1升浓盐酸中含12.0克当量的盐酸(HCl),则浓度为12.0N。 当量浓度=溶质的克当量数/溶液体积
    2.胰岛素:
    10mg溶于2N盐酸2ml,浓度为5mg/ml。过滤除菌。
    分为20份,每份100微升含0.5mg,分装在EP管里。保存于说明书要求的条件下
    使用时取2份加入100毫升培养基里,终浓度为10微克/ml。保存在4度。

    希望对你有所启发!
  • bohe221 (2012-8-07 15:48:44)


    感谢楼上,只是不明白要用盐酸溶,含有盐酸的胰岛素加刀培养的细胞里面,不会有副作用么?
  • loli (2012-8-07 15:49:04)


    这是sigma对它的说明:
    CLEAR COLORLESS SOLUTION AT 2MG PLUS 1ML WATER (PH ADJUSTED TO 2.0 WITH HYDROCHLORIC ACID)
    cuturl('http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search/SpecificationSheetPage/SIAL/I5500')
    它有点难溶于水,加盐酸是助溶。
    盐酸是H和Cl离子,你认为加到培养基里有影响吗?除了改变pH。当然盐酸要用分析纯的,培养基的缓冲力够好,或者加的盐酸总量不多。
  • bohe221 (2012-8-07 15:49:49)


    请问loli,您知道睾酮怎么配制不?
  • loli (2012-8-07 15:51:21)


    对不起!我没接触过。建议你到内分泌那问一下或搜索一下。还有到Sigma看看,可能同一种东西有很多讲究的,比如地塞米松也有水溶性的。最好的办法是看文献了。下面是我略加搜索的:
    丙酸睾酮 本品为白色结晶或类白色结晶性粉末;无臭。本品在氯仿中极易溶解,在乙醇或乙醚中易溶,在醋酸乙酯中溶解,在植物油中略溶,在水中不溶。

    你的实验感觉很多东西要加,希望你实验顺利!
  • bohe221 (2012-8-07 15:51:39)

    是啊,我培养的细胞需要添加许多因子,目前在准备阶段,郁闷的是就连配制一些溶液也这么难哈,谢谢您的鼓励。
  • am10 (2012-8-07 15:51:57)


    我的药要用无水乙醇溶解,请问用一般的滤膜过滤可以吗?谢谢
  • zhenxin (2012-8-07 15:52:13)


    藥品怎麼配, 濾膜耐不耐化學品都是有得查的.
    配藥品比較方便的就是查原廠的網站,
    像是Sigma大多會提供技術資料,
    有時候就寫在藥品型錄裡面的.
    另外, 你用的濾膜能不能過乙醇,
    請去查閱你的濾膜的原廠型錄,
    通常這些資料都在那裡面.
    不過, 濾膜的材料有好幾種,
    要先知道自己用的是哪種材質做的.
  • sunnyB (2012-8-07 15:52:35)

    为什么要考虑滤膜啊?
    先滤好了培养液,然后往里头加添加物就行了啊,不要再滤过了!
  • vera+ (2012-8-07 15:53:09)

    有些添加物必須要自己配,
    這些添加物不一定是無菌的,
    當然在配好後必須過濾除菌啊~
  • bohe221 (2012-8-07 15:53:23)


    还是同意楼上,添加物要过滤。不过一般都没有那概念,就是买Millopore0.22umd的一次性过滤器。还是要查查比较放心点。
  • bohe221 (2012-8-07 16:01:04)


    对了各位群友,如果用乙醇稀释因子,乙醇量为多少不至于对细胞产生太大冲击呀?
  • bohe221 (2012-8-07 16:01:25)

    感觉就是在哪个帖子里面见过乙醇的量来着,就是忘了,唉,没办法。
  • Ao7 (2012-8-07 16:01:42)

    我看的文献小于0.1%或0.2%都可以的。还想请问一下,这种Millopore0.22umd的一次性过滤器就可以用来过滤无水乙醇溶解的药物了吗?谢谢哦!
  • loli (2012-8-07 16:01:58)


    关于用什么滤膜的问题,我上面的回帖已经给出了答案。
    实验室用的滤膜主要有水系和有机系的。
    针式滤器适用于实验室少量样品的过滤,它对样品的吸附性小,因而保证少量或高价值样品的最大回收量,滤器的外壳由聚丙烯材料制成,用超声波焊接,不含粘合剂,因而不会污染样品。针式滤器中配有混合纤维素膜(水系)、尼龙膜(有机系)或聚醚砜膜,可根据样品的性质选用,方便可靠。
    随便搜索一下就知道了。如要查具体品牌的直接去网站就知道了。
  • TNT (2012-8-07 16:02:25)


    请问:
    例如,添加胰岛素,有本书上写:溶剂,0。01mol/l HCL; 储存液浓度,1mg/ml; 使用浓度5ug/ml。
    那末就是说,先配制储存液,若要配1000ml的含胰岛素的培养基,就在1000的基础培养基中加入含5ug胰岛素的储存液吗???

    楼主,我想我们目前面对的问题是相同的,多多切磋!!
  • bohe221 (2012-8-07 16:04:59)

    你说的配制胰岛素方法没错,不过我们一般都是等要添加的时候才加到培养液中的,好像没有直接配在培养基里面的哦。
  • dog002 (2012-8-07 16:05:14)

    那你最后的培养基配制好后,测渗透压吗?怎莫测?有谁知道兔子细胞的渗透压呢?
  • bohe221 (2012-8-07 16:05:59)


    我的因子都是另外添加没有配在培养基里面那呢,呵呵
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