[求助]请人帮我做了流式分析, 可还是不会看图!


我看了好长时间斑竹及各位高手有关流式分析的帖子 还下载了cellquest软件的说明书 还是满头雾水 不好意思 太菜了 那个东西对我来说还是太复杂

我想明确一个细胞系的cell cycle, 用pI染色 该如何操作软件?主要是更不明确各种参数的设定

先行感谢!

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最新回复

  • mamamiya (2012-8-07 17:48:43)

    看了我们的工作还没有到位!
    您所说的内容太广,不好回答!因为:“明确一个细胞系的cell cycle”太大!您想要什么?细胞系正常培养的周期分布?周期检测点?cyclins?CDKs?凋亡的周期特异性?
    cellquest不是一两天学的会的!要在机上操作,有人指导!而且需要学习流式细胞仪的原理,染色步骤,原理等!
    一步一步来吧!有耐心,有机会总是学的会的!
  • utt0989 (2012-8-07 17:49:38)


    hdhdhd0000, Thank u so much!

    actually I want to know which cell cycle my two normally cultured cell lines in, such as g0,g1,s, or whatever. I just guess maybe they are different in the case of cell cycle.it looks like they are different in proliferation speed.

    we have a becton dickindon facscalibur in our lab, but unfornately, no one knows how to operate it.

    I have read some literature about facs and now have a roughly impression in my mind. so what should I do next?

    thanks again!
  • utt0989 (2012-8-07 17:50:06)


    我把细胞用PI染色, 别人帮我分析, 给了直方图。我还是看不明白,请各位帮忙!

    其中data001和002 是对照组, 003 是实验组。 003细胞比其他两组生长缓慢。

    谢谢!


    57845005.jpg

  • zranqi_1 (2012-8-07 17:50:50)


    就这个图说几句:
    1 如果001对照中的1.2分别是G0G1和G2M的话,那么从003的图看,应该是两个细胞周期

    2 但是001中的1.2似乎距离太近,导致2不象G2M,如果2是S期的话,即001中1.2分别是G0G1和S,则003中的3是G2M期,即003中1.2.3分别是G0G1、S、G2M

    3 上述分析只是凭经验而言,按道理应该用软件进行分析

    4 建议找帮你做的老师要分析好的结果,各期比率、CV值等都有,更便于理解


    64925856.jpg

  • fsdd817 (2012-8-07 17:51:31)


    用荧光3做DNA分析的时候,主要看看荧光面积,用线性不用log!可以将各期分开一些!

    每个实验室有自己的习惯,我们这里习惯将G0/G1期调整到线性时的200荧光道数,那么G2/M期自然就在400处了!

    dui上面图中的左下图的1,2,3持怀疑态度,建议用线性拉开后,通过其它方法,如gate的设置,或者Modfit软件分析。

    在fsc/ssc图的gate1打开后再打开一个面积/宽度图,设置gate2。然后看面积直方图。(R2=G2)
  • utt0989 (2012-8-07 17:55:11)


    我将按照你们的建议试一下, 但对我来说很有难度。

    再次感谢!
  • utt0989 (2012-8-07 17:55:35)


    这次作了较为详细地分析 请问我该如何定性?有细胞周期停滞吗 ?
    其中data005 是试验组 其他均为对照。用powerpoit 打开

    谢谢!
  • utt0989 (2012-8-07 17:56:13)


    sure. 001 is my negative control and 005 is a cell line that grow more slower than the control. so, how to analysis the result they gave to me?


    [ 本帖最后由 utt0989 于 2012-8-7 17:57 编辑 ]


    87333122.snap.jpg

  • utt0989 (2012-8-07 17:58:32)


    then 005


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