[求助]关于用流式测定细胞表面CD11B/CD18的问题

最新回复

• 乌贼老弟 (2012-8-11 09:08:58)

  QUOTE:

  原帖由 bs4665 于 2012-8-11 09:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  用流式细胞仪测定中性粒细胞表面CD11B/CD18 ，分别用FITC 及PE标记的单抗，得出的阳性细胞百分比值 非常高，两种抗体都是小鼠来源的，有影响吗？测定没有设阴性对照，不设阴性对照可以吗？这种双标记是否也可以得到荧光强度，急盼 ...

  特异性抗体当然相互影响小些，反之不然。
  
  没有阴性，何来阳性？？
  
  什么叫“是否也可以得到荧光强度”？荧光就是通过强度来观测的，当然有了！！？？对您的这个问题不是很理解，我想就是您想知道能不能这么做，是吗？应该是可以的！试试看！
  
  好运！

• bs4665 (2012-8-11 09:19:07)

  没有阴性，何来阳性？？
  
  我实验上机是没有阴性对照管的，实验室老师说以荧光强度接近基线的阴性，阴性与阳性两者细胞群容易区分，这样可以吗？
  
  什么叫“是否也可以得到荧光强度”？荧光就是通过强度来观测的，当然有了！！？？对您的这个问题不是很理解，我想就是您想知道能不能这么做，是吗？应该是可以的！试试看！
  
  我不了解，平均荧光强度与平均荧光强度比值是否是一样，实验室老师说没有阴性对照管，所以不能得出荧光强度值？我刚接触流式细胞仪测定，许多概念分不清，请多指教。
  
  还有看见文献中阴性对照多为加FITC 及PE标记的同源的IGG，是去除非特异性荧光染色吗？用荧光标记的单抗非特异性荧光染色多吗？我如果加阴性对照，应该如何做？用PBS代替同源的IGG可以吗？
  
  非常感谢帮助，急盼

• ending (2012-8-11 09:20:16)

  最好用同型对照做一个，作为阴性对照！用PBS不行！如果用非特异性抗体的话，效果当然不好，会增加阴性比例，也就是阴性对照增高！
  
  荧光强度在本版的流式总结里面有附图说明，请学会“搜索本版”！
  
  由于没有阴性对照，因此无法界定阳性细胞！当然很多时候CD11B测分化时可以看见2团细胞，可以分开，但是这样的试验发结果到杂志时，人家肯定要求同型对照的！
  
  好运！

• bs4665 (2012-8-11 09:21:39)

  谢谢斑竹，同型对照的抗体好贵，定抗体时间也来不及，怎么办呢？
  哪位好心人有同型对照抗体，小鼠FITC-IgG2a RPE-IgG1

• 一叶 (2012-8-11 09:22:14)

  
  实在不行就用非特异性抗体！
  虽然是下策！

• bs4665 (2012-8-11 09:22:40)

  
  非常感谢您提供的帮助。
  非特异性抗体? 是指用FITC 或RPE 标记的小鼠源的其他抗体吗？能举个例子吗？我与同学联系，有可能会找到同型对照的抗体，他也是做大鼠中性粒细胞表面分化抗原的，但他的同型对照与我用的单抗不是一家公司的，可以用吗？

• HP007 (2012-8-11 09:25:51)

  
  用流式细胞仪测定中性粒细胞表面CD11B/CD18,您用的荧光标记的抗cd11b和cd18b抗体，如果是单克隆抗体，那么，抗体就仅仅和相应抗原结合，如果仅仅静态测表达，不用也行！但是，如果是非特异性抗体，也会和其它抗原结合，所以要降低背景，用同型抗体做对照！
  具体情况根据您自己的试验而定！
  
  好运！

• bs4665 (2012-8-11 10:13:21)

  谢谢斑竹帮助。同型对照已经找到，我想测中性粒细胞表面CD11B、CD18的表达量及双标记的阳性细胞百分比，上机各管该如何加样？

• bs4665 (2012-8-11 10:13:54)

  
  对不起，因为对流式不了解 ，总表达不清楚。实验室老师说一个样本要做四管，1 、样本+FITC-IGG（同型对照）；2、样本+PE-IGG（同型对照）；；3、样本+FITC-IGG+PE-IGG；4、样本+FITC-CD11B+PE-CD18 ，这样可以吗?是不是每个样本都需要这样做，同一批的几个样本可以只取一份做对照吗？同型对照的平均荧光强度有意义吗？平均荧光强度比值是如何计算的？

• dog002 (2012-8-11 10:23:09)

  对不起，因为对流式不了解 ，总表达不清楚。实验室老师说一个样本要做四管，1 、样本+FITC-IGG（同型对照）；2、样本+PE-IGG（同型对照）；；3、样本+FITC-IGG+PE-IGG；4、样本+FITC-CD11B+PE-CD18 ，这样可以吗?是不是每个样本都需要这样做，同一批的几个样本可以只取一份做对照吗？同型对照的平均荧光强度有意义吗？平均荧光强度比值是如何计算的？
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  1. 从你的样本管看，应该是买的单标抗体，如果标本量足够，建议直接这样设置：样本+FITC-IGG；样本+PE-IGG；样本+FITC-CD11B；样本+PE-CD18
  
  2 如果标本良不大，需要节约标本，那么建议：样本+FITC-IGG+PE-IGG；样本+FITC-CD11B+PE-CD18 ；样本+FITC-CD4-PE-CD8。其中样本+FITC-CD4-PE-CD8标记淋巴细胞，是为了调节颜色补偿
  
  3 同一批的几个样本可以只取一份做对照
  
  4 同型对照的平均荧光强度当然有意义，你的结果要以它为分母计算比值的
  
  5 平均荧光强度比值是用你所测得的CD18或CD11B的荧光强度除以相应的同型对照的荧光强度得到的

• bs4665 (2012-8-11 10:32:27)

  十分感谢 ，我测定的结果中是不是只能得到CD11B或CD18单标记的细胞荧光强度，而不能测出双标记的细胞的荧光强度，而可以得到双标记的细胞的阳性百分比？

• dog002 (2012-8-11 10:33:42)

  双标记的细胞你得到的是FITC和PE的两个荧光强度和百分比。