[求助]细胞凋亡检测方法如何选择

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-8-11 16:56 作者: any333 来源: 分析测试百科网

各位前辈，要检测细胞凋亡，检测方法的选择应遵循什么原则，必须既有形态学方面，也要有定量吗？一般需要最少两种以上，是吗？Annexin v-PI 双染是目前最好的检测方法吗？除了这种方法，最好再选择哪种呢？我是个新手，看了不少关于细胞凋亡的文章，始终定不下到底应该选择哪种，请指教！很急！

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我佛慈悲 (2012-8-11 16:57:06)

我认为首先应该确定你的细胞有没有凋亡，如果有，再决定用几种方法来验证。
确定有无凋亡可用Annexin v-PI 双染，因为该方法对早期凋亡比较敏感，如果没测出明显的凋亡，换别的也可能测不出。
用Annexin v-PI 双染测出凋亡后，可根据标本或样品情况选择其它的方法来验证，但我认为这并不是必须的，很多高质量的paper也只用一种方法测凋亡。当然你也要根据你下一步的实验需要，如果你想进一步确定该凋亡是线粒体途径还是死亡受体途径，你可以检测相应的caspase或选择线粒体途径的试剂盒等等。
HP007 (2012-8-11 16:59:15)

方法很多：Sub-G1,Annexin V-PI,ladder,tunnel,TdT,API.........
根据试验具体选择!
misswu61 (2012-8-11 16:59:31)

我的课题就是做的和细胞凋亡有关的，所以有些经验可以介绍给你，我觉得最简单的是形态学的检测，Hoechst染色，用荧光显微镜观察，很便宜，200多块买的染料，做到死也用不完，加上如果你的凋亡形态好，出的图像也漂亮，周期也短，很直接就可以看到结果。还有大家都选择的是DNAladder，步骤是很简单，不过要想真的做出漂亮的LADDER可能还需要下不少的功夫，还有一种是流式细胞来检测，也不算贵，这三种应该都是用的非常多的。
gemei0115 (2012-8-11 16:59:47)

我个人认为，DNA Ladder是凋亡检测方法中比较难做成功的，即使凋亡细胞的比例不少也不一定能做出来。
用荧光显微镜检测形态学的染色情况，方法简便易行，但如果你要比较几种细胞之间凋亡是否有差异，最好还是用流式，因为形态学的结果统计起来比较烦，你需要数每个视野的细胞总数和凋亡细胞数，而且选择视野时容易受到主观因素的影响。
any333 (2012-8-11 17:00:31)

我用Hoechst染色，荧光显微镜观察有无凋亡，最近刚做，没有什么经验，不知你能否将你对照组和发生凋亡组的图片贴上来让我学习学习。谢谢了。
kewanqi2011 (2012-8-11 17:01:15)

我是新手，大家能否帮我看一下下面这张图有没有细胞凋亡，多谢

29941976.snap.jpg
kewanqi2011 (2012-8-11 17:01:50)

我是新手，大家能否帮我看一下下面这张图有没有细胞凋亡，多谢

20526621.snap.jpg
kewanqi2011 (2012-8-11 17:02:07)

还有一张，这张是否是正常细胞的形态

95627017.snap.jpg
KGZ564 (2012-8-11 17:02:52)

最好的办法就是既有形态的，又有数据的，形态的东西比较直观，做得漂亮的话会很吸引人的眼球的，数据的东西又可从统计学方面说明问题，加上形态会很有说服力的。建议流式+TUNNEL,或流式+DNA ladder,或流式+Annexin v-PI 双染的爬片，（既有特异性的标记，又可观察到核的改变，颜色对比鲜明，又能充分说明问题）。
kewanqi2011 (2012-8-11 17:03:13)

请大家帮我看一下是不是凋亡呀
skytree (2012-8-11 17:03:29)

理论上检测细胞凋亡应该应用三种以上的方法，我的个人建议如下：流式细胞术计数最为客观，应该作为首选；形态学方法最为直观，可以选择一种，建议试一试丫啶橙染色；生化学方法可以用DNA LADDER，但成功率不高，可用TUNEL法代替，建议使用罗氏公司的试剂盒。我近几年一直在做细胞凋亡方面的研究，几乎试过了所有的方法，如有问题可以与我联系。
remenb (2012-8-11 17:04:26)

我也在做细胞凋亡，也想请教一下。
1.能详细介绍一下Hoechst的具体步骤么？
2.我的细胞形态不太规则，有爪，做过一次流式结果不太好，有人说流式测凋亡比较适合那种圆型的细胞，是这样的么？
希望各位高手不吝赐教。
101010 (2012-8-11 17:05:00)

正常细胞和早、中期调亡细胞均可被Hoechst着色。

正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的蓝色颗粒；
调亡细胞核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状。

细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：
Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；
Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；
Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1)。
viviwang1987 (2012-8-11 17:06:18)

请问怎样联系啊?荧光法采用Honchest33342/PI 双染法可以么???