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[求助]请大家鉴定细胞污染种类
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各位主任战友们好，这次作lipofectamine 2000转染，24孔板铺了12个well，结果有两个well惨遭大难，在园子里找了很久资料，不过还是有些地方搞不太清楚，因此前来发贴向各位请教，烦请不吝教学，谢谢。
症状：转染完隔24小时后发现其中一个well的medium颜色变黄褐（我们家的细胞株是MDA MB 435S养在L-15），而且有白色棉絮团样物质漂浮于培养液上，40x光镜下观察是浮动的黑色团状渣渣，另外一个well的污染是在当天换液后约4-5小时发现浮现同样的白色棉絮团样物质及培养液变色
因为我们的转染细胞很珍贵不能丢，所以只好一直跟污染对抗，污染的well用PBS洗数次之后，全部的well都加上G418（顺便筛选转染细胞），之后污染的情形似乎有得到抑制，但是无法杀死所有的污染物。
而将抽出来的污染medium拿去作H-plate（Bacto tryptone+NaCl+agar）的四区划位，24小时后有菌落生长。
基本上跟师姐推敲觉得这次的污染可能是细菌污染，因为我们实验室细胞操作用pipet是跟分生共用的，估计是有这个可能性，我们在400x下才能勉强看到单个的污染个体形态，没看到明显串珠状，而且污染的cell cycle时间很短，G418可以抑制；
不过在园子里搜了很久资料，发现低倍镜下念珠菌跟细菌污染的图都长的很像，其实看贴子看了半天还是不清楚如何区别，想请各位确定一下这是什么污染
40光镜下：
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最新回复
zhenxin (2012-8-11 17:08:03)
100X光镜视野
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zhenxin (2012-8-11 17:08:22)
200X光镜视野
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zhenxin (2012-8-11 17:08:43)
400X光镜视野
渣渣的附近有分散的小黑点，看起来圆圆的，请问可能是球菌污染么？
55490809.snap.jpg
zhenxin (2012-8-11 17:12:45)
400X光镜视野黑渣渣特写
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zhenxin (2012-8-11 17:13:04)
400X光镜视野
这是另一个well的污染，污染的单体看起来也是圆形的，但是亮亮的，不是小黑点，
请问这是另一种球菌的污染么？还是只是因为这个well的G418加的比较早呢？
烦请各位主任及战友帮助解惑了，感激不尽
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jrwyyplt (2012-8-11 17:14:19)
从你描述的特征来看
我认为是发生了真菌的污染，
产生了大量的菌团
外面那些透亮的小点
我认为可能是细胞崩解后的碎片
因为我培养的细胞生长不好的情况下有时也会有这样的小点
zhenxin (2012-8-11 17:14:49)
另，
现在知道死细胞团跟细菌污染的渣渣如何作简单区别了，虽然低倍下看都是相似的黑渣渣，但高倍镜下死细胞团的颗粒形状较大，而且圆颗粒会透亮透亮，细菌团高倍下看还是不怎么透光的黑渣渣，
注：我们这株cell line是MDA-MB-435S，信息不是绝对，纯粹供作简单参考。
zsxan1990 (2012-8-11 17:15:20)
能不能给大家看看你的细胞长什么样啊
zhenxin (2012-8-11 17:15:52)
ATCC上的细胞相片
正常形态咱没照过，不过加了G418筛三天的有照过，附张 100x的
细胞贴壁，正常形态是纺缍状
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2541 (2012-8-11 17:16:10)
各位好:
我也遇到上述的污染,我一直没有办法消除,一直怀疑是支原体,但是没有确证.
希望有高人指点啊!
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