[求助]如何纯化神经元

最新回复

• zhenxin (2012-8-11 17:21:47)

  首先你在培养细胞时要尽量除去软脑膜和白质等，其次接种前要洗一次细胞，最后是加阿胞的时间应为接种后24-48h。不知你的具体情况，你自己根据自己的情况检查吧，我们加阿胞后纯化的效果还是不错的，也可以考虑再加大一些浓度，但也不能太高。

• baidukk (2012-8-11 17:22:09)

  
  看见你的贴子，我好象找到救星了，非常谢谢。
  因为现在实验室不方便使用解剖显微镜，我是将整个大脑取出，包括皮质、白质还有海马，相当于是混合神经元，这样就不好去掉软脑膜和白质。现在实验问题是：杂细胞较多；有很多团块物（感觉有很多细胞颗粒）；细胞透明颗粒状物很多，但又没漂浮（应该不是死细胞），但又没突触（又不是神经元），请问是什么细胞；你们24h后要全量换液吗；使用了神经元生长因子没；胰酶是用的多大浓度？
  很多罗嗦问题，恳请赐教，不胜感激》

• dog002 (2012-8-11 17:22:50)

  
  我也一直在做神经细胞方面的实验，下面是我的经验所谈。虽然没有解剖显微镜，但仍然可以把大脑皮层给分离出来啊，这一步很关键的，你这里肯定包括了皮层神经元细胞、海马神经元细胞、成纤维细胞、胶质细胞。24h一定要全量换液，生长因子就不需要加了，但如果你用血清培养，需要加1％N2；胰酶浓度我都是用0.125％，消化30分钟。加阿糖胞苷是纯化神经元的一种办法；另一种办法也可以用98％neurobasal medium＋2％B27（但较血清培养比较贵），这种方法不需要加阿糖胞苷了。
  祝好运

• yes4 (2012-8-11 17:23:10)

  我们能不能以后多交流。我一直就在怀疑我取材不纯，你是怎样取的大脑皮层？你有神经元细胞培养的具体资料没？能不能给我发一份，非常感谢。

• mickeylin (2012-8-11 17:23:54)

  
  楼上朋友，虽然没有解剖显微镜，但是你必须拥有一对非常尖锐的镊子（比如电镜镊），当你把鼠的整个大脑完全取出来的时候（一定要保证无菌状态，在此就不罗嗦啦），放在解剖液里，这时候，你就可以把覆盖在大脑表面的皮层取下来，然后，在取好的大脑皮层组织块周围肯定有不整齐的边缘，因为你没有解剖显微镜，只能凭感觉，用那对尖尖的镊子夹住皮层边缘似乎可看的见的薄膜（这个就是脑膜），然后把它撕掉即可。不知道我说得是否明白？

• pencil菲 (2012-8-11 17:24:58)

  
  怎样可以把覆盖在大脑表面的皮层完好的取下来,需要一些特殊的器械还有仪器不? 不胜感激!

• mimili_901 (2012-8-11 17:25:14)

  
  这位仁兄,大脑皮层是包裹在整个脑组织上面,不需要非常完整的取下来,只要取大部分就可以了,因为皮层神经元细胞数量非常多,足够你使用的啦,何况即使有解剖显微镜,我都会扔掉约一半的皮层(为了确保皮层的干净),特殊的器械就是一定要保证有一对非常尖锐的镊子,挺好买的,六七十元人民币/双.其他就靠你一双非常明亮的眼睛以及胆大心细的双手啦,呵呵
  先买几只刚出生的大鼠在普通的有菌环境里先练练手,然后再在超净台里在做几只练手,保证时间,皮层取出时间不宜过长,否则皮层神经元细胞活性不好.

• october7 (2012-8-11 17:26:28)

  
  我也在做神经元培养，虽然细胞活性不是很好，由于***作慢，但是细胞纯度还是能80%以上，给你推荐Neurobasal + B27(50*)+ Glutamax(100*) 以上试剂均为 invitrogen products