[求助]细胞缺氧

最新回复

• dotaaa (2012-8-13 12:53:59)

  你可以用这个方法造成细胞缺氧损伤，相对来说，条件要求比较低。
  Na2S2O4 induce cells hypoxia injury
  24h after seeding, cells were washed twice with warm D-Hank’s and 100μl D-Hank’s containing 2mM Na2S2O4 was added to the flask. After a 50 min incubation, cells were washed once with warm D-Hank’s and the supernatant was replaced by fresh medium containing drug.

• xingyi08 (2012-8-13 12:54:22)

  
  请问Na2S2O4诱导缺氧模型的原理是什么？可以预先给药吗？谢谢！

• sunnyB (2012-8-13 12:54:52)

  QUOTE:

  原帖由 xingyi08 于 2012-8-13 12:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  请问Na2S2O4诱导缺氧模型的原理是什么？可以预先给药吗？谢谢！

  （1）连二亚硫酸钠（Na2S2O4）是氧清除剂，它能清除培养基中的氧，它在短时间内即可造成细胞缺氧损伤；（2）以95% N2-5% CO2饱和的含1 mmol/L Na2S2O4的DMEM低氧溶液(氧分压为1-2 mmHg)

• xingyi08 (2012-8-13 12:57:56)

  
  谢谢！
  请问95% N2，5% CO2是通过什么装置给的？

• toy (2012-8-13 12:58:20)

  我想做细胞缺氧，条件是37度，5% CO2+ 95% N2。一般的培养箱达不到要求，符合要求的培养箱又没有。怎么办呢？非常感谢！
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  细胞缺氧的方法大致来说有两种:一种是物理缺氧法,即通以95%N2和5%CO2一定时间来形成一个缺氧的环境:一种是化学缺氧法,一般是将连二亚硫酸钠加入培养基,连二亚硫酸钠可以将培养基中溶解的氧排出,从而形成缺氧的环境.
  物理缺氧法比较常用,一般的培养基达不到条件可以自己自制一个简易的缺氧装置即可,关键是密闭性好,向缺氧盒内通入95%N2和5%CO2一定时间,用氧分析仪来检测其中的氧含量,一般小于5%就可以了.密闭好了置于一般的培养箱一定时间.
  我就是这么作的,效果还比较好~~
  祝顺利!

• qumm1985 (2012-8-13 12:58:46)

  请问你的混合气是怎么来的？我们医院不能供给混合气，也需要自己制成吗？还有你说的氧分析仪哪有卖的？价钱如何？我也想做缺氧模型，又没有可以冲氮气的CO2培养箱，真是急啊，做试验好难啊，再加上我是在职的，白天没时间，不知要做到哪一天

• tianmei001 (2012-8-13 12:59:03)

  
  混合气是买来的,一般卖氮气的地方就有卖的.你可以问一下.氧分析仪你可以上网查一下,总共有三代产品.我用的是第二代的,足以.1260买的.买的是上海的.具体的你可以上网搜一下,很方便的,再决定.标准的co2还是一定要有的,不然怎么作?缺氧箱可以自己设计一下制作就可以了.
  祝顺利!

• fsdd817 (2012-8-13 12:59:23)

  
  卖氧气给医院的公司一般都有混合气卖

• xueyouzhang (2012-8-13 12:59:58)

  
  请问你们怎样确定有没有成功啊？通过MTT发检测还LDH？MTT值会增大还是？
  培养基LDH会增加吗？谢谢

• rxcc33 (2012-8-13 13:00:18)

  我们实验室用两种办法。一种是BD卖的缺氧袋。一个袋子大概一张普通明信片那么大。里面有氧清除剂，一次试验做8个小时。
  一种是买一个密封充气箱（一种圆形的透明塑料的盒子,比高压锅矮一点宽一点。。），然后用混合气灌在里面，要做16个小时。（我正在做这一种）
  我做的Vascular Muscle cell culture, 用的药是益母草，浓度1ug/ml。
  除氧前先换成有药的serum free medium，incubate一小时。 然后开始缺氧试验。
  然后cell count, LDH assay,用TRIzol提RNA，再做RT-PCR。
  大概这样。。

• rxcc33 (2012-8-13 13:00:38)

  
  LDH assay的结果好像很不稳定。只能大概比一下大小。 就算同一个well里面同一台机器 连着读两次，读数也变的很厉害。 如果真要比。最好做3个duplicate 然后算一下平均值和标准差。 真的要定量看的话，用这个就不大行。。。