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[求助]请教有关胶原酶消化的问题
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请问各位群友一个问题：我用胶原酶消化组织后，所得到的液体非常粘稠，用1000转的速度10min无法将组织碎片沉淀下来，即使有部分沉淀，吸上清的时候，由于粘液太稠，因此又将底下部分带了上来。因此很难将胶原酶除去。而接下来还要进行胰酶的消化，只有将胰酶直接加到还混有几乎所有胶原酶的组织碎片中了。不知道大家有没有遇到过类似的问题呢？如何除去胶原酶？非常渴望各位的宝贵建议！此过程中我没有用EDTA中和，是否有影响？谢谢。
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最新回复
redbutterfly (2012-8-13 13:40:43)
胶原酶消化后将液体用PBS稀释5倍，然后混匀离心即可。最好用水平转头，不要用45度的，否则很难离得下来。第一次离心速度调至1200转，离心后用PBS重悬，然后800－1000转离心即可。一般不用培养基重悬，因为培养基中的钙离子会引起细胞成团黏附。胶原酶只能通过离心洗去，不能加EDTA抑制。
skytree (2012-8-13 13:41:09)
太谢谢了！
我用的胶原酶是用无钙镁的PBS配制的，一般都用有钙镁的，请问会影响消化效果么？直接用胶原酶能够得到单个细胞么，效果如何？
园丁## (2012-8-13 13:41:26)
胶原酶消化如果掌握不好，会产生胶状物（粘糊糊的东西），会黏附细胞而无法分离出来。
最好能告之具体情况，便于站友们帮你分析解决。
skytree (2012-8-13 13:41:44)
哦，我用的是2mg/ml的浓度，sigma的collagenase，在37°下消化16小时，后来得到的正是胶状物，离心无法看到明显沉淀，者是否意味着消化不好？是过度了吗？
园丁## (2012-8-13 13:42:11)
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得到的是胶状物，意味着消化条件没掌握好，不一定是过度了。
ritou1985 (2012-8-13 13:42:28)
消化时间过长，一般37度2－4h，4度过夜。不能37度16h。否则细胞全死光，释放出来的DNA使溶液变粘。
TNT (2012-8-13 13:42:46)
我发现我用0.15%的胶原酶消化剪碎的脂肪30分钟和50分钟，，在下层也是有一团胶冻状的，里面还有白色棉花纤维样的纤维，最下层的沉淀也是没有什么单个核细胞。什么原因呢？有什么办法呢？离心前也吹打了，也加了PBS稀释。
TNT (2012-8-13 13:43:10)
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一般37度2－4h，4度过夜。不能37度16h。否则细胞全死光，释放出来的DNA使溶液变粘。
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请问你们是指消化什么组织，要得到什么细胞？
园丁## (2012-8-13 13:43:49)
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提高胶原酶浓度、增加消化液的容量（提高消化液与组织的比例）、振摇消化可以避免产生胶冻。消化时间可根据细胞分离的情况而定（可见到溶液变混、组织消失）。
胶冻状通过加DNASe可以减轻，但其产生已经表明细胞受损，应该是避免出现。
skytree (2012-8-13 13:44:06)
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