[求助]请问G418筛选预实验是用未转染细胞做吗

最新回复

• jujuba (2012-8-13 16:05:14)

  
  G418筛选预实验是用未转染的细胞.
  我做的是G418配成10mg/ml，用时临时稀释

• biabiade (2012-8-13 16:05:28)

  
  每孔加多少培养基和G418，可以具体说说吗

• biabiade (2012-8-13 16:05:49)

  
  我打算这样，500+0ul、490+10ul、480+20ul、470+30ul、460+40ul、450+50ul、440+60ul、430+70ul、420+80ul.........390+110ul,前是培养基后是G418

• milkdog (2012-8-13 16:06:12)

  我打算这样，500+0ul、490+10ul、480+20ul、470+30ul、460+40ul、450+50ul、440+60ul、430+70ul、420+80ul.........390+110ul,前是培养基后是G418
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  这个梯度设置的太密集了。可以倍比增加，或者用0，10，20，50，100也就差不多了。你主要是看看多大的剂量能够杀死细胞。然后好选 一个比较合适的剂量来筛选转染的细胞。太密集了差别不会大的。

• biabiade (2012-8-13 16:18:59)

  这个梯度设置的太密集了。可以倍比增加，或者用0，10，20，50，100也就差不多了。你主要是看看多大的剂量能够杀死细胞。然后好选 一个比较合适的剂量来筛选转染的细胞。太密集了差别不会大的。
  
  ————————————————————————————————————————————————
  
  是不是说按0ul/ml,100ul/ml,200ul/ml，500ul/ml,1000ul/ml的G418等级加，那一共要5孔就可以了是吗

• windy+++ (2012-8-13 16:19:14)

  
  G418筛选要做预试验确定最佳浓度，将细胞稀释至1000cell/ml，每孔100ul加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释至0,,100, 200,300, 400,500, 600,700, 800,900, 1000,11 .00ng/ml等１2个级别, 培养10-14天，以最低细胞全部死亡浓度为基准，一般400-８００左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持使用筛选浓度的一半。

• vera+ (2012-8-13 16:19:33)

  
  是ng还是ug啊

• summerxx (2012-8-13 16:19:53)

  请问G418筛选预实验是用未转染的细胞还是转过的？是预实验
  那含G418的培养基是不是要预先配成相应浓度的呢，还是在24孔里临时稀释
  
  ————————————————————————————————————————————————
  
  1、G418筛选应用未转染的细胞。
  如果是用转染的细胞还有什么意义呢？假若你转染成功，多大的浓度还是问题吗？！
  2、G418最好配制成不同的浓度。临时配制怎么配？你知道加入的浓度是多少吗？技术含量太高了吧。
  按楼上战友说的应该差不多吧。我们这一般用400-800的浓度就差不多了。
  
  个人意见，仅供参考。

• yueban-1147 (2012-8-13 16:20:12)

  
  G418的浓度应该是以ug/ml算，另外要注意G418的有效含量
  我的G418瓶上写着746ug/mg，既G418的含量为74.6%。称量时要注意

• gemei0115 (2012-8-13 16:20:30)

  
  老师让我配的G418100mg/ml,用的时候临时配成0.6mg/ml,加到培养基里.
  细胞是已经转染后的CHO细胞,具体G418的作用我还不清楚,还有为什么楼上说要稀释那么多倍数?是不是转染过的细胞就不需要筛选了?