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[求助]有关细胞冻存

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-8-16 10:45    作者: 49888    来源: 分析测试百科网

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[求助]有关细胞冻存

我今天想冻存细胞，消化后用PBS吹下来离心，用冻存液悬浮时却发现有成团的细胞，怎么也吹打不开，以前冻这个细胞时都没有出现过这种情况。我把成团细胞挑出来发现粘性比较大，有谁知道这是怎么一回事？真的很郁闷，请各位战友不吝赐教，先拜谢了！
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  • junhun (2012-8-16 10:45:32)


    有可能你的细胞老化了，也有可能你的细胞没有消化彻底，还有可能是你离心时速度太大了。
    为什么要用PBS重悬呢？我们一般都用培养基重悬。

  • kent (2012-8-16 10:45:51)


    加点EDTA和胰酶一起消化试试看，我们实验室就是这么做的，对于细胞成团现象有很好的控制。

  • xingyi08 (2012-8-16 10:46:19)


    可能是消化时间没够，就吹洗细胞了。
    或者是上一次消化有没打散的细胞，培养几天后就聚堆。
    加点肝素与胰酶一起消化试试.

  • u234 (2012-8-16 10:46:35)


    用EDTA和胰酶消化,我觉得消佛确实不错,但EDTA的残存会影响传代细胞的贴壁,请问一下怎样才能消除EDTA 的影响呢?
    谢谢指教!

  • 兔唇 (2012-8-16 10:46:57)


    可以消化以后离心去除

  • idea2011 (2012-8-16 10:47:40)


    消化之后，最好用加有血清的培养基重悬细胞，因为血清中的一些因子可以中止胰酶的作用，如果用PBS，残留的胰酶作用使细胞容易破裂，导致悬液比较粘，而且这样收集的细胞状态都不会太好，冻存效果不好

  • eric930 (2012-8-16 10:48:38)


    细胞加入冻存液后,-70度过夜,然后直接沉到液氮中.

  • eric930 (2012-8-16 10:49:57)

    消化结束后,是否用10%牛血清终止反应?

  • vera+ (2012-8-16 10:50:25)

    一个可能是你没有用血清终止消化，细胞被消化破，或者你吹打过于用力，也使细胞破裂，总之可能是细胞破裂，导致DNA出来，所以才形成如此粘稠的细胞团块。其实是DNA和其它东西搅在了一起。

  • u234 (2012-8-16 10:51:06)

    一个可能是你没有用血清终止消化，细胞被消化破，或者你吹打过于用力，也使细胞破裂，总之可能是细胞破裂，导致DNA出来，所以才形成如此粘稠的细胞团块。其实是DNA和其它东西搅在了一起。

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    请问,哪里有细胞团快形成的理论啊?有相关的参考文献没?

  • abc816 (2012-8-16 10:51:22)


    不知道你离心后用培养液重悬所用的时间长不长，最近我也出现过这样的情况。
    是因为离完心后正在干别的事情就让细胞在离心管底呆的时间长了点，重悬的时候也是很难吹打的开。
    个人经验，仅供参考，好运！
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