[求助]胎盘滋养细胞培养

最新回复

• moonlight45 (2012-8-16 10:52:47)

  我也要做滋养细胞的原代培养，不过现在觉得有点困难，初步设想是从正常绒毛组织提取，在显微镜下分离，如果有进展我会和你联系。
  大家可以相互交流

• bohe221 (2012-8-16 10:53:05)

  
  我打算做滋养层细胞融合试验，也需要做滋养层原代细胞分离纯化。有时间可以交流一下！

• zzzz (2012-8-16 10:54:06)

  我也正在做滋养细胞培养，觉得有点困难。
  原代就是不好做啊。
  希望我们可以交流一下。

• 831226 (2012-8-16 10:54:22)

  我前段时间也做过滋养细胞培养，
  原代就是不好做啊。
  希望我们可以交流一下。

• tianmei001 (2012-8-16 10:54:39)

  
  我也正准备在做滋养细胞的分离与培养，我看了一些资料，都觉得采用消化和PERCOLL离心法最好，我感觉不同浓度的PERCOLL的配制非常重要，因为不同浓度的PERCOLL则意味着不同的密度，其分离的原理就是密度梯度离心法。你分过组织中的淋巴细胞吗？ 我觉得是一回事。

• pengke1983 (2012-8-16 10:55:11)

  
  我最近的胎盘细胞培养总是出现问题，在消化后离心总是出现红细胞 不能够完全离心下来的问题，开始怀疑是胰酶液体渗透压出了问题，可是用测定了渗透压是320，与血浆渗透压很接近应该不是这个问题了，可是找不到原因，郁闷中，有没有高手指点一下。
  还有就是Percoll的分层总是不太好，而且Percoll离心后总是有红细胞散在于Percoll中不能完全离下来，不知道是为什么，紧急求助！

• yysr238 (2012-8-16 10:56:20)

  你好！我也在做和你方法一样，但是我只是把percoll分成了两个梯度，350，450，结果不好，没找到那个所谓的云雾状细胞层。。望多交流！

• ero11 (2012-8-16 10:57:01)

  我做过早孕绒毛滋养的培养，没有用percoll，太麻烦，容易污染，下面是我的培养方法，比文献上简单，易操作
  组织块法：
  无菌条件下，取妊娠6～8周人工流产绒毛组织浸泡在含400U/ml青霉素和400U/ml链霉素生理盐水中，4℃保存待用。完全清除绒毛组织中的蜕膜，用D-hank’s液反复冲洗，去除血块、杂质，用眼科剪将绒毛剪下，去除中间轴心部分，再将绒毛组织彻底剪碎成约1mm3大小碎片。挑取少量组织直接接种至多聚赖氨酸包被过的培养瓶中，加入少许（约2ml）完全培养基培养。
  消化法：
  绒毛组织彻底剪碎成约1mm3大小碎片后收集入离心管中，加入3倍体积的0.25%胰酶-0.02%EDTA和0.1%胶原酶复合消化液（1：1），37℃消化5min，弃上清。再加消化液同法消化4次，收集每次消化后的上清液，加完全培养基终止消化后，收集消化液入50ml离心管中1000r/min离心5min，弃上清，细胞沉淀用含20%胎牛血清的完全培养基重悬。调整细胞数目，细胞计数以 5.0×105个/ml接种于50ml培养瓶中继续培养。2h后以差速贴壁分离法去除成纤维细胞。待细胞长满瓶底时，用含0.25%胰酶-0.02%EDTA消化液传代。

• daod (2012-8-16 10:58:13)

  
  我回去按着这个方法去做一下。
  不过还是想问您几个问题：
  1.请问在您用消化法时，最后得到的重悬液接入培养瓶中时，有无细胞碎片啊？有的话是如何处理的？碎片太多会影响细胞贴壁情况吗？
  2.在您的方法中，共消化了5次，第一次消化后弃上清是为什么啊？
  3.后4次每次消化后是直接用吸管吸取上清液还是离心以后收集上清液呢？
  4.在您取回材料来之后，浸入生理盐水中置于4度保存待用，可保存多久阿？时间太长的话组织活性是不是会受到影响呢？
  5.您认为比较组织块法和消化法那个所的细胞纯一些？
  再次感谢！！

• ladyhuahua (2012-8-16 10:58:29)

  我们以前做过，比较难，不过我有两张图，等我去实验室拷贝回来让你们看看

• viviwang1987 (2012-8-16 10:58:59)

  
  我们原来打算用巨细胞病毒感染滋养层细胞的，结果没成功

  
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