[求助]细胞爬片的具体制备过程及所需的试剂和材料

最新回复

• 小螺号 (2012-8-22 19:57:02)

  
  简单点的话，你可以用玻璃刀将载玻片切割成小块，大小根据你细胞种在哪个培养体系具体定。一般使用24孔和6孔板。切割好的玻片高压灭菌，然后用多聚赖氨酸（具体浓度请你自己查）溶液浸泡，随后取出，超净台下凉干，这样就制备好了包被过的玻片，有利于细胞贴附、爬板。其余的试剂和材料与一般的细胞培养一致。将细胞消化下来，配成合适的细胞悬液，种入已放有包被过的载玻片的培养板中，常规培养。但注意，取放板子要轻柔，不要频繁移动载玻片。一段时间后你就会看见细胞在玻片上涨起来了，等到细胞数量合适，超净台下用镊子取出载玻片去做免疫组化就OK了。（嫌麻烦，玻片不包被也行，我做过能行）

• wu11998866 (2012-8-22 19:57:18)

  
  我用的是六孔板做的细胞爬片，直接买血盖片（不要用盖玻片），泡酸过夜后，自来水冲洗干净，然后蒸馏水冲洗，放到培养皿中（建议一片一片的放，这样很容易烘干），烘箱烘干后，再高压消毒，就可以用了，我没有打明胶，细胞长的也很牢固。
  再就是在制备爬片的时候，把六孔板放到培养板之后，在爬片和六孔板之间点一点培养基，使之结合紧密，然后再把制好的细胞悬液点到爬片上就可以了。注意一定要控制细胞的数量，最好计一下数，这样才不会使细胞长的过密，影响试验。
  祝楼主试验顺利！

• superboy (2012-8-22 19:57:38)

  
  谢谢楼上两位朋友的解答。还想请教，将爬片取出来后如何固定到载玻片上？

• qumm1985 (2012-8-22 19:57:54)

  
  涂点凡士林

• bananapeople (2012-8-22 19:58:11)

  我还想请教：凡士林是涂在没有细胞的那一面吗？那封片的时候怎么封？是在上面再盖一张盖玻片吗？

• misswu61 (2012-8-22 19:58:31)

  
  如何减少爬片中的气泡？在显微镜下气泡很影响观察！
  如果爬片是用来做荧光的，那细胞数目是不是不能太多？

• eric930 (2012-8-22 19:59:07)

  我还想请教：凡士林是涂在没有细胞的那一面吗？那封片的时候怎么封？是在上面再盖一张盖玻片吗？
  
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  完全可以！
  
  我觉得爬片中的气泡应该封片时的问题，滴树胶、压盖波片的时候注意一些应该可以避免。无论哪种细胞化学，细胞都不能太多，否则细胞重叠会影响观察效果。

• 园丁## (2012-8-22 19:59:36)

  我还想请教：凡士林是涂在没有细胞的那一面吗？那封片的时候怎么封？是在上面再盖一张盖玻片吗？
  
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  凡士林是涂在没有细胞的那一面，只是用于免疫组化染色时临时固定，染色结束脱水后用二甲苯洗去，将爬片（盖玻片）的细胞面用树胶封在载玻片上。

• zzzz (2012-8-22 20:00:55)

  
  请教一下，做免疫荧光也用凡士林吗？做荧光观察的时候不影响吗？