[求助]关于嗅鞘细胞培养的问题

最新回复

• summerxx (2012-8-24 12:22:23)

  
  不知你是不是培养嗅神经鞘细胞的，你可以看看这篇文献，若有不明白请可以直接联系作者，请求帮助。祝你好运！文献： 成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养的研究 神经解剖学杂志 2005 Vol.21 No.2 P.180-184

• 101010 (2012-8-24 12:22:48)

  
  谢谢。我查阅了不少文献，基本的培养方法我也知道，我问的是实际操作中碰到的问题，亲自做过的人才会解释的清楚。

• summerxx (2012-8-24 12:23:22)

  
  你可以与文献作者联系，作者肯定有较丰富的经验。我的建议仅供参考。

• HP007 (2012-8-24 12:23:45)

  
  本人建议如下：
  1 嗅球的神经层和颗粒层的剥离比较困难，应该尽量剥离完全，否则杂质太多会促使细胞贴壁。
  2 0.25%胰酶消化后产生类似胶冻状的物质，是正常的现象，和剥离完全与否无关，是DNA的影响。先把细胞离心一下，再用胰酶消化，吹打，可以稍微减少粘性物质的产生。还可以直接用机械吹打法，这样就可以避免粘性物质的产生。
  3 在过滤的时候，液体短时间无法通过200目细胞筛网，主要还是DNA的影响。
  4 神经干细胞培养密度很关键，密度太低不容易长好，建议比参考文献密度稍微高点。

• 101010 (2012-8-24 12:24:05)

  谢谢楼上的，我还想请教一下，胰酶消化时间过长会不会影响细胞的活性，开始我做的时候尽量消化的时间长，想消化的完全一些，后来发现细胞都死了，不知道是不是与消化时间过长有关系，现在我就是严格的遵守15-20min，正在观察中，不知效果如何。还有就是那些胶冻状物质很讨厌，离心以后不容易把上清去除，一不小心就把那些胶冻状物质吸了上来，离心就算做了，你说的机械吹打法我试过，效果好像不怎么好。
  再次表示感谢！

• vera+ (2012-8-24 12:24:22)

  
  胰酶消化时间过长会影响细胞的活性。神经干细胞非常娇嫩，消化太狠会影响细胞活性，促使细胞贴壁分化。
  消化时间关键和胰酶的活性有关，胰酶消化时间也不一定严格限定在15-20min，如果刚配出来的胰酶，10分钟足够。
  胶冻状物的确很讨厌，处理方案还是建议如上，先把细胞离心一下，再用胰酶消化，吹打，可以稍微减少粘性物质的产生。

• 101010 (2012-8-24 12:26:35)

  
  再次请教各位高手，我的嗅鞘细胞在培养24小时后差速贴壁，转移培养瓶后好像不贴壁，而且细胞团比较多，各文献报道不一，到底多长时间嗅鞘细胞可以贴壁，并且出现典型的细胞突起？
  再有，一次性的塑料培养瓶是不是都是多聚赖氨酸包被过的？

• zhenxin (2012-8-24 12:27:07)

  
  哈哈，老兄是想培养神经元，不想把神经干细胞给培养出来了。
  如果包被了多聚赖氨酸会在外面的包装上注明的。
  但是一次性培养瓶都经过特殊的处理，可以促进细胞贴壁，各个厂家处理方法不同。
  到底多长时间嗅鞘细胞可以贴壁，这不好说，根据当时条件而定。
  一般加胎牛血清和多聚赖氨酸诱导分化，3－5天可以看到典型的贴壁，有时要1周，偶尔还会看不到。这个要自己体会。
  养这个玩意很伤脑筋，慢慢熬吧老兄。
  祝好运！

• 101010 (2012-8-24 12:30:11)

  
  要是一直不贴壁，我怎么换液啊？

• zhenxin (2012-8-24 12:31:18)

  
  半量换液。
  取一半含细胞的培养基离心，加新鲜培养基把离心后获得的细胞吹打分散，再放回培养瓶。

• 101010 (2012-8-24 12:32:36)

  
  今天观察细胞（行差速贴壁法后1天），看见一团一团的蜂巢状东西，没有悬浮细胞，请同学鉴定，他们说好像不是细胞，因为没有明显的细胞特征，但是我的培养瓶中除了这个就什么都没有了（培养步骤都是按照文献来的，自认为没什么失误的地方），请问，这个究竟是不是嗅鞘细胞啊？请各位有经验的战友鼎力相助啊。

• zhenxin (2012-8-24 12:33:14)

  
  哈哈，老兄最好传一张照片上来啊。否则咋知道你描述的蜂巢状东西到底长的啥样？