[求助]细胞培养求助！

最新回复

• bohe221 (2012-8-24 13:34:37)

  
  你别哭啊，你的细胞很可能是污染了。我建议你重新把培养细胞用的滴管、培养瓶、离心管等所有和细胞培养有关的东西都重新消毒，必要时重新泡酸，洗管子。还有一个必须高度重视的是培养液，你可以让师兄姐帮忙验证一下，要是培养液有问题的话，一般情况下培养过夜就能看出来。不要太着急，肯定这些没有污染后重新复苏一支细胞，很快就能长好的。
  细碎，还有一个可能就是你换液时吹打的厉害，但我觉得根据你说的，这种可能性较小。你再分析分析，祝好运！

• zzzz (2012-8-24 13:34:52)

  楼主什么细胞？原代还是细胞系？原代也可能跟过度消化啊吹打有关的，或者跟培养液质量有关，你最好再说得细一些或者上传图片，大家就能有更好的建议了！

• flower-201 (2012-8-24 13:35:11)

  
  谢谢，是卵巢癌细胞，如果是污染，培养液却是清亮的。细胞状况始终不好，生长较慢，细碎、应为长杆状现变园，内有粗颗粒（好像变老特别快），有较多细胞碎片，经过较长时间后也能铺满瓶。

• flower-201 (2012-8-24 13:36:39)

  
  还有问题：细胞传代后状态会变坏，加胰酶前先用PBS洗了一下，有人说PBS渗透压不好，细胞会变形，是这个原因吗？另外加入Heps的浓度怎样？怎样配制？请各位高手多多指教，好急！谢谢

• Ao7 (2012-8-24 13:37:49)

  
  第一个关于状态不好的问题：(生长较慢，细碎、应为长杆状现变园，内有粗颗粒（好像变老特别快），有较多细胞碎片)
  我觉得可以适当提高下血清浓度，条件允许，用进口血清试试；在提高浓度的同时，要根据以往经验定一个相对长点的换液时间间隔，让细胞静养，我们实验室常常替别的实验室抢救细胞，一个方法就是充分养料，标准孵箱环境静养，有一次把别人唯一一株要绝种的细胞系静养一个月给抢救回来，所以还是行之有效的；
  第二关于消化的问题，既然细胞状态不好，可以减少消化时间，这个条件要自己摸了；关于PBS，我们认为没有太大影响，顶多再细致些可以在使用前在室温多放会儿，别4度拿出来就加入培养瓶里。

• remenb (2012-8-24 13:38:15)

  
  同意楼上的观点，出现以上这些表现主要是你的细胞状态不佳所致。目前首要任务是如何拯救你的细胞，我建议：（1）提高血清的浓度，或改用进口血清，可以使用进口的胎牛血清，效果很好，我的师弟以前养细胞也是屡养屡死，后改用进口胎牛，现在细胞好的一发不可收拾，忙得不亦乐乎，进口的质量就是没话说；（2）增加细胞密度，若你一直用100ml的培养瓶建议换用50ml，以加大细胞的培养密度，特别是对肿瘤细胞，彼此之间生长信号的传递很重要，所以要保持一定的细胞密度；（3）可以更换培养瓶，减少细胞垃圾（细胞代谢产物、凋亡细胞的碎片等）的影响；（4）适当延长换液的间期，让细胞有一个适应和自我调整的时间，有些情况下细胞是可以慢慢长起来的，但所需的时间很难确定，若细胞本身状态尚可，很短的时间内细胞就长起来了，我的师弟就遇到了这样的情况，还算运气好的了！若养了一段时间仍不见好转，假若不是罕见的稀世细胞系或细胞的价格不菲，建议还是放弃的为好，继续养下去只会浪费血清，并且细胞的状态也不一定适合做实验。
  此外，就要寻找引起这种情况的原因：（1）是否出现了支原体的污染；（2）实验过程中处理吸管等烤的时间过久，紧接着又吸细胞，活活把细胞给烫死了，可惜呀！我的师弟就曾干过这样的事；（3）洗细胞所用的pbs有可能也是问题所在，本人曾分别用两个实验的pbs处理过标本，后来细胞说不行就不行了，脚一蹬就去见了上帝，后发现是两个实验室用的pbs的渗透压有差异；（4）不要等细胞完全长满后才传代，这时的细胞已经过了对数生长期，并且因为接触性抑制导致细胞生长速度减慢，这种特性在肿瘤细胞内会形成一定的遗传因素传给下一代，而影响后面的细胞生长。

• flower-201 (2012-8-24 13:38:43)

  谢谢！现在细胞好像有自溶现象，每次一传代，第二、三天就有好多细胞漂着，细胞数越传越少，而且长的很慢，眼看快不行了。请问消化后消化液倒掉后直接加血清可以吗？要不要离心？心碎了！吃不好，睡不好，实验无法进行！

• DDD (2012-8-24 13:39:33)

  传代的操作可能有问题，记得消化完用血清中和胰酶；其实试验的一些 细节很关键，比如说培养箱的温度，rong2liu 的分析也说明这一点。

• sunnyB (2012-8-24 13:40:19)

  你不要着急，我的细胞跟你说的情况有点相似，原来长的很好的细胞，结果不知道什么原因老是长不起来，我已经排除了细胞株本身的问题，现在考虑是不是培养基的问题，昨天换了别人的培养基，细胞已经长满了，今天已经传代了，看看明天怎么样了。
  前两天我也是睡不着，吃不好，跟舍友说细胞亡，我也要亡了，但是着急不是解决问题的办法，有句话说的很好，“毫无畏惧的生活，直面所有的障碍和困境，并充满信心的克服”，很喜欢，从一开始做试验就不顺利，曾经也想放弃，但是还是坚持下来了，什么事情只要是勇敢的去面对没有解决不了的，以上面的那句话自勉！
  希望我们的细胞早日好起来，试验顺利结束！

• flower-201 (2012-8-24 13:40:54)

  
  衷心感谢大家对我的帮助与鼓励.谢谢.我现在考虑消化的问题,因为有两瓶细胞,中间部分和其他几瓶一样,但靠近瓶壁边缘很窄的那些区域细胞长的不错,是不是消化液没达到,吹打也不容易的地方长的好呢?