[求助]细胞爬片固定后在孔板里做免疫组化还是粘到...

最新回复

• rxcc33 (2012-8-25 09:12:55)

  
  如果不看荧光，两种都可以，感觉粘好了再做要快一些，但是做的时候要防止脱落。
  
  如果看荧光，就不能用中性树胶粘，直接在24孔，或6孔板里做才可以。中性树胶要折光，散射的光干扰，没办法看细胞本身的荧光。

• remenb (2012-8-25 09:13:10)

  
  孔板里做免疫组化较方便，细胞比盖玻片易贴壁，但染色后不能用二甲苯透明、封片（可用甘油）。
  细胞爬片固定后粘到载玻片上不太可能，只有开始就让细胞贴在玻片上爬片。
  附图是本人在孔板做染色。

  
  45302575.jpg

• join (2012-8-25 09:14:38)

  各位好：我转染后在板子中做免疫组画，我用的是贴壁细胞，发现很多细胞掉了，麻烦告诉我怎样解决。

• xueyouzhang (2012-8-25 09:14:55)

  
  我没有在多孔板里做过，其实把细胞爬在盖玻片上也不是很麻烦，偶这样做很少掉片。
  先将消化好的细胞悬液滴几滴在盖玻片上，由于液体的表面张力，细胞悬液一般不会流淌到盖玻片外面，等细胞大概贴壁后，不同细胞贴壁时间稍有不同，大概6、7个小时，差不多贴壁再加生长液，开始滴的细胞的数量你要摸索一下，到固定时细胞生长到80％左右比较合适，后面的接我上一个帖子，按部就班来就行了。

• join (2012-8-25 09:15:15)

  若是贴壁细胞，是不是可以不用多聚赖氨酸爬片。
  若是转染后细胞有死亡或是转染后诱导了细胞凋亡，而我要检测凋亡的情况，怎样才能让凋亡的细胞也在片上而不掉下来。因为凋亡细胞可能贴壁不好。

• shenkunjie (2012-8-25 09:17:08)

  
  我是养细胞新手，想知道细胞组化的详细步骤，希望那位高手指点一下，非常感谢！万分感谢！

• yueban-1147 (2012-8-25 09:17:32)

  我是养细胞新手，想知道细胞组化的详细步骤，希望那位高手指点一下，非常感谢！万分感谢！
  
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  免疫组化有很多中，间接法，ABC法，Envision法等等可以找相关的书看看,我想说的是，载玻片爬片后固定一般用95％的乙醇30分钟固定，然后37度风干。后续的抗原暴露还是要专业人士，才做的好，呵呵！