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[求助]293T细胞培养求助
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我的293T，养着养着越来越不好了，不知怎么回事。我用10％进口新牛血清（PAA公司产品）DMEM，未加抗生素，刚要来时还行，不太知道什么时候传代，有人说70－80％就得传，还有人说要长满了再传，但有时长不满，长多了就会成层长，看着乱七八糟，成摞，看不清细胞个数和形态，一般这样好像就老了，再养就不好了。还有就是传代时我把握不好，我用0.125％胰酶消化，基本是润一下就倒掉，原来还放孵箱里1分钟，现在倒掉胰酶就加培养基吹细胞，细胞倒是很容易吹下来，一片一片的掉，但成团，吹不开，后来我多吹一会，吹的用力一点，培养基里都是泡沫了，就吹开了。结果细胞贴壁后，就有很多细胞碎屑，杂质，黑点，看着特别脏。细胞内部的黑点也特别多，瓶中的黑点也很多。生长速度减慢，不怎么长。越传越不好。冻存后，很难复苏，好的时候也就贴50％，这次复苏几乎没几个贴的，我就这一瓶了，别人也不养了。要不到。所以还在努力把这个养好。对了，我原来用新的塑料瓶养，后来用处理过的塑料瓶，后来用玻璃瓶养。用新瓶状态挺好（相对），用处理得前一阵还行，现在经常大片大片的脱，用玻璃瓶，细胞多的时候先试了一瓶，还行，后来就不行了。
那位养293T的高手帮帮忙，我就要毕业了，还停在这里，万分着急，先谢谢了。
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最新回复
tangxin_80 (2012-8-25 12:00:45)
你的胰酶浓度低了一点，我用的是0.25%，且含0.02%的EDTA，这样的话，吹打细胞后，细胞容易分散，不会成团；消化的时间也不用太长，一分钟以内即可。吹打次数不要太多，10次以内就可以了。再就是你的培养液，每次用之前，一定要升温至37度，不然对细胞损伤较大。
idea2011 (2012-8-25 12:03:56)
293T的贴壁性不是很好（如果需要的话可以用多聚赖氨酸包被一下），消化时间也比较短。
49888 (2012-8-25 12:35:08)
我养293前段时间也出现和你同样的问题,不过现在好了.前面说你胰酶浓度低了一点，我用的是也是0.25%.最重要的就是293一定不要长到超过90%在传代.它长的太老了,马上就会出现你所说的那种脱落和不帖壁的情况了.所以一定要在80%时就传代.因为293不耐受挤压,一受挤压它的形态就会发生改变.
还有就是293在室温下也很容易大片脱落,所以最好是先开空调,等温度降下后在拿出观察.
另外,你应该及时多冻存保种,一出现你现在这种状况时细胞状态就已经不好了,就应该丢弃重新解冻新的.再者293传到30多代形态就会自然发生改变了,已经不能做为实验用了
还有就是在它还没贴壁前就是有部分已经开始贴壁时最好不要动它,等12h后它完全贴壁再观察
这只是我个人的经验,希望相互学习,祝你好运!
zranqi_1 (2012-8-25 12:35:38)
因为这种大管子的管口比较大
不会损伤细胞
吹打的时候最好不要起泡沫
还有培养基里还是加上双抗吧
细胞状态不好
也可能是污染
祝你顺利！
bohe221 (2012-8-25 12:35:59)
831226 (2012-8-25 12:36:49)
caihong (2012-8-25 12:37:11)
“结果细胞贴壁后，就有很多细胞碎屑，杂质，黑点，看着特别脏”与我当时所观察到的现象很相近。你所说的杂质、黑点其实就是细胞碎片。
导致这种现象的原因，后来我分析可能是因为由于我前面操作的不合理（比如传代的时机不恰当，等到细胞长得很老了再传），结果导致细胞整体的活力下降，老化。这种结果是长时间积累下来的。因此，我个人认为，细胞养成这样不太好挽救了。建议楼主不要在这种细胞上耽误时间，重新复苏新的细胞是比较明智的选择。
如果楼主将这个问题解决了，别忘了告诉我一声。
祝好运：）
lagua123 (2012-8-25 12:37:29)
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