以毛细管转移进行Northern Blotting转印实验方法与步骤

要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上，这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vacuum transfer) 与电转印法 (electroblotting)。 毛细管转移法借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上;要转印完全，起码需要作用6 h以上。 虽然所需花费的时间比较长，以其不须要特别的仪器设备，毛细管转移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA时采用变性聚丙烯酰胺胶体电泳，则必须以电转印法进行RNA转印。至于膜的选择，硝基纤维素膜的优点是比较不会产生非专一性反应;不过其一旦被润湿再烘干的后，容易碎裂，不适用于进行多次杂合反应。 尼龙膜的优点是韧性好，与核酸结合的能力也相当强，正可以弥补硝基纤维素膜的缺点，现已成为主流。 一旦将RNA转移至膜上后，即可以利用紫外线照射法 (uv irradiation) 或真空干燥法 (在真空下80℃加热2 h) 将其固定于转印膜上。