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[求助]HO染色中遇到的问题
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各位前辈,我在做HO33342染色中出现了一些我不明白的问题1)正常细胞染色后核里分布许多的亮点,我不明白这是什么原因造成的.(2)是先固定后染色还是先染色后固定或者是不固定直接活染做临时装片观察?以下是我做的具体步骤,请指点一二:
(1)抽取细胞清洗离心(普通的离心机,没有用冰冻离心机,是否有影响?)
(2)固定(甲醇:冰醋酸=3:1,10min)
(3)滴片(用固定液的细胞悬液直接滴片)
(4)自然风干
(5)染色 (10ug/mlHO33342,37度,10min,生理盐水稀释)
做临时装片荧光显微镜镜检
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最新回复
hold住 (2012-8-27 17:55:55)
你可以尝试着将染色液用滤纸或更小的孔径滤器过滤一下。
也可以直接在培养瓶中原瓶固定，不需要风干 即
固定完了后弃去固定液直接 加入染色液
还有一点就是你的染料问题，你要确保你的染料配制没有问题，有的时候染料没有彻底融化，所形成的颗粒进入胞核即形成你所说的亮点了
ha111 (2012-8-27 17:57:02)
我看过一些关于调亡的HO染色的图片,核里也是有比较明亮的亮点.我会注意我的药品的溶解以及过滤的问题,谢谢您的解答.我还有一些问题,就是1)温度:有的说是37度染色十分钟,有的是冰中染色30分钟,不知道哪个会好一点.(2)固定:先固定后染色还是先染色后固定,用什么固定液,固定后会不会荧光的强度(3).封片:需不需要封片,好象有专有的封片,不知道有没有这个必要.感谢感谢..............
one (2012-8-27 17:57:55)
解释一下:三楼是我师兄,由于我发帖心急,没有注意到不是自己的号,以此造成的误解希望主任能够理解.理解万岁!
还有昨天少说了一个问题,就是我在查资料的时候发现有说HO是不溶解于磷酸缓冲液的,是不是在这个过程中就不能用PBS清洗.但我查看相关的帖子时发现,相当多的步骤中还存在用0.01M的PBS清洗或者重悬,不知道这个有没有什么影响?最后就是PI的适染浓度是多少?
ffooll (2012-8-27 17:58:32)
HO怎么回不溶于PBS,我的就是用PBS配制的，很好溶 。
wu11998866 (2012-8-27 17:59:02)
这是我看实验书中所写
Ao7 (2012-8-27 17:59:41)
windy+++ (2012-8-27 18:00:20)
但是我昨天刚配的 ，0.01M PBS溶解，很好溶。我们实验室以前用含Ca\Mg的PBS配制，我的不含Ca\Mg
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