[求助]看一下细胞培养指南这个贴看一下细胞培养指南这个贴

最新回复

• eric930 (2012-8-30 12:01:44)

  
  胰酶消化细胞间的纤维能力比较差，因此可能有大量细胞裹在纤维中不能获得。一般消化时加胶原酶可以较大程度上减轻这类现象。

• yhz1973 (2012-8-30 12:02:16)

  胰酶消化细胞间的纤维能力比较差，因此可能有大量细胞裹在纤维中不能获得。一般消化时加胶原酶可以较大程度上减轻这类现象。
  
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  我主要要的是表皮，纤维主要存在于真皮中吧，是不是我分离表真皮时，真皮去的不干净，所以会有这种现象，如果真皮去得不干净，加了胶原酶后，会不会消化下来很多纤维，使消化下来得表皮细胞不纯净？
  非常感谢你的回复，给我很大启示！

• yhz1973 (2012-8-30 12:02:44)

  
  在胰酶中加EDTA怎样？大概会有什么样的效果？如果消化下来很多纤维，可以用什么方法去掉。

• junjie05 (2012-8-30 12:03:58)

  
  表皮细胞的培养条件比较特殊，特别是低钙，这种情况下成线维细胞不能生长，传代几代即可除去。另外可用筛网，160目，挤压过筛也可。

• tieshazhang (2012-8-30 12:04:50)

  
  我们实验室是这样分离表真皮的，还比较干净，希望对你有用！
  一般就是取幼鼠（3d）皮肤全层，去除皮下组织，切成0.5×0.5的组织小块，0.25％胰酶4度消化过夜，24h捞出来手动分离，一拉就分开了。表皮是银白色的，真皮有些透明，再分离表皮细胞吧，我们分离ESC一般都能成功！

• tieshazhang (2012-8-30 12:06:05)

  
  发生之原因有许多种，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin) 造成，这些凝絮沈淀物不会影响血清本
  身之品质。若欲减少这些凝絮沈淀物，可用离心3000 rpm, 5 min 去除，或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物，因为会阻塞过滤膜。
  
  个人意见哈，希望对你有帮助

• plaa (2012-8-30 12:06:34)

  有没有台盼兰染色看看活细胞比例？有时死细胞会粘成团，很难吹开，如果这样你吸掉就行了

• yhz1973 (2012-8-30 12:07:14)

  有没有台盼兰染色看看活细胞比例？有时死细胞会粘成团，很难吹开，如果这样你吸掉就行了
  
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  这到没有,我明天做的时候试试.你一说到提醒我:我觉得我用D-HANKS把细胞悬液再洗一遍时就出现了这种成团的细胞,怎么吹也吹不开.在胰酶中加培养液中止后离心时就没有,镜下看没洗的细胞多些,增殖也好些.是不是我有D-HANKS洗它,反而对它造成很大损伤?这是怎么回事?

• yhz1973 (2012-8-30 12:07:44)

  我们实验室是这样分离表真皮的，还比较干净，希望对你有用！
  一般就是取幼鼠（3d）皮肤全层，去除皮下组织，切成0.5×0.5的组织小块，0.25％胰酶4度消化过夜，24h捞出来手动分离，一拉就分开了。表皮是银白色的，真皮有些透明，再分离表皮细胞吧，我们分离ESC一般都能成功！
  
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  我用你介绍的方法分离表真皮确实比较容易就分开了.但是我今天用0.25%的胰酶消化24h我分离出来的表皮,怎么感觉消化下来的表皮细胞很少,文献上说应该是用胰酶消化的呀.恕我孤陋寡闻,ESC是什么细胞,是存在于表皮的吗?你们是用什么消化的??

• one (2012-8-30 12:09:08)

  
  我们分离的是基底膜上的表皮干细胞（ESC），也是用0.25%的胰酶啊。