[求助]神经细胞培养出现污染

最新回复

• mickeylin (2012-8-30 13:10:45)

  
  培养瓶有没有检查过呢？
  滤过的东西也不一定无菌，你可以取适当量上述液体放于37度进行培养，如果有菌则可见其变浑浊，这样是做好的确定液体是否污染的方法，但首先要确定你的培养平是无菌的。
  另外试验前一定要把无菌室彻底消毒

• windy+++ (2012-8-30 13:11:09)

  
  污染原可能出现在培养箱中……

• viviwang1987 (2012-8-30 13:11:41)

  整个暑假，培养的神经细胞周围都出现小的旋转和移动的黑点，然后逐渐增多，影响细胞的贴壁。我把细胞培养液，胰酶，和d——hanks都过滤了，但还是出现了污染。我现在非常的焦急，唉郁闷！请各位前辈指点，晚辈感激涕零！
  
  ————————————————————————————————————————————————————————————————
  
  根据搂主描述的情况，您的细胞很有可能感染了支原体，就像2楼所述滤过的东西也不一定无菌，应该取适当量上述液体放于37度进行培养，判断是否存在污染，如其变浑浊，可能要重新配置了，培养瓶的清洗消毒过程是否严格，细胞培养来不得半点马虎，好好查一下，问题会解决的，也会对自己是个提高。

• zzzz (2012-8-30 13:12:24)

  
  1.如果是细菌污染的话，培养瓶中的培养液很快变浑浊，在镜下看会有很多点点在自由自在的做不规则的运动，细胞也很快脱壁而死亡。你可以把培养液吸出来一点，然后放在灭菌的LB培养基中培养一夜，如果便混浊啦，说明就是细菌污染。
  2.但是如果变浑浊的不那模块，而且这些小点点只是随着你移动培养瓶而动，那说明可能是细胞碎片，这样的很可能是你的培养基PH不符合要求，不在7.2-7.4之间，这样细胞很不容易贴壁，也不易分裂增殖，而且容易成团脱壁。
  3.至于支原体污染，一般不会有的，也很难会有，如果出现那镜下看不出,细胞很不容易贴壁，也不易分裂增殖，而且容易成团脱壁。
  4.再有，要想培养好细胞，各种超作必须按照细胞培养的要求做，如培养瓶一定要先用洗涤剂泡，然后用软毛刷将底壁刷干净，泡酸过夜，自来水洗15次、一蒸5次，二蒸3次，配置液体用底瓶灌也应该这样洗，不然很可能影响细胞底贴壁和生长。
  5.配置底液体PH值很重要，必须要在7.2-7.4之间。
  祝好运。

• nn255 (2012-8-30 13:13:20)

  
  你做的是神经原代培养吗?
  一般是种在板上,即使细菌污染也不容易看出浑浊.
  而原代培养最容易引进污染的途径就是在取材的操作过程中.所以应该在操作过程中更加小心.
  出现黑色移动小点并不一定就是污染,也有可能是取材过程中死细胞崩解的碎片,如果种板时细胞活性不好,细胞也会逐渐死亡,也会有黑点增多的情况.
  如果是污染,黑点会做自主运动,和细胞碎片的运动是不一样的,在200倍镜下仔细看可以区分出来.

• wmp1234 (2012-8-30 13:13:55)

  
  你做的是神经原代培养吗?

• yueban-1147 (2012-8-30 13:14:25)

  
  我也做过神经原代培养，也出现了同样情况。查找污染是很困难的，最后发现是血清污染了。根据楼主所说情况，应该是支原体没错。

• plaa (2012-8-30 13:14:42)

  
  支原体在光镜下是看不见的，所以小黑点不可能是支原体。
  是一种叫做黑焦虫的东西。
  换用质量好的血清一般能解决这个问题。