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[求助]如何挑取细胞克隆
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GFP融合逆转录病毒载体转染PT67细胞，G418筛选两周时间后抗性集落已经形成，但这些抗性集落里仍然有部分不能要，我希望从中挑选出想要的集落。由于目前集落已开始生长，部分集落中心的细胞由于没有空间生长已经脱落，所以必须尽快挑出。请问有哪些简单的方法（克隆环实验室目前没有，到公司定恐怕来不及，如果哪位有借用一下可以么，我将万分感谢）？先谢了
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最新回复
园丁## (2012-8-30 13:55:39)
dongdongqiang (2012-8-30 13:56:03)
谢谢你的回复，但我是用100mm平皿做的，共有10多盘，细胞密度也已很大，这种方法似乎太浪费。我听说有用滤纸做的，您知道具体的做法么？谢谢！
kuaizige (2012-8-30 13:56:32)
你可以试试我们的方法。如果你们的操作台里有显微镜，那就直接用。如果没有，就把显微镜用酒精擦，然后放在操作台里，紫外灯消。先准备1.5毫升离心管，每管50微升消化液。用200微升的枪头在显微镜下，吸单克隆，培养液不倒掉。觉得吸的效果不好，可以轻微的用枪头把细胞从壁上铲下来，很容易下来，所以一定要轻一些。你可以先找不太明显的克隆练习。镜下的枪头很大，有液体的影响，要先适应 再操作。把吸出的细胞放到离心管里消化2-3分钟，移到预先准备好的6孔板或者24孔板中，板中已加入完全培养液。
dongdongqiang (2012-8-30 13:56:54)
多谢，我拿几盘试试看。另外我剪了一些滤纸片，跟克隆差不多大小，我准备把它灭菌后沾取胰酶，然后把滤纸片贴到克隆所在位置消化2，3分钟，再用镊子拔下滤纸片，希望消化下来的细胞沾在滤纸片上，不知这样可行否（即滤纸片有没有可能把细胞粘下来 ）？
dongdongqiang (2012-8-30 13:57:20)
听说有国产克隆环，哪位知道上海哪里买得到？多谢！
S6044 (2012-8-30 13:57:38)
这样的方法我没有做过，你可以试试，看看还有没有人提供好一些的方法。祝你实验成功
dog002 (2012-8-30 13:58:17)
我觉得用滤纸挑克隆的效果很好,因为我刚做过,不过先剪成小块,然后灭菌,将克隆在显微镜下标记好,将滤纸浸泡在姨酶中,然后置入克隆位置3-5分钟,用拈子取出!置入培养基中,待细胞贴壁后将滤纸取出!
misswu61 (2012-8-30 14:01:17)
可是金属的针头断端会不会对细胞的损伤太大呢？也许我的担心是多余的
qumm1985 (2012-8-30 14:14:06)
<GFP融合逆转录病毒载体转染PT67细胞>，请问老兄GFP融合逆转录病毒载体怎么得到的，自己构件还是买的，能否提供信息，谢谢。
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