[求助]流式细胞的问题请各位高手帮忙!

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-9-01 16:33 作者: avi317 来源: 分析测试百科网

各位大侠:
请帮帮我,我用流式来跑PI进行染色来进行凋亡分析,但是近来一直有一个问题没有解决:在坐标横坐标为FL2-A 纵坐标为counts的图中的图象一直不正常拖带现象很严重几乎是一个三角形,而没有出现双峰或者单峰(以前我跑一直是双峰),分析出来的Channels(FL2-H) / number 的图形也久不对了,各位大侠指教一下到底是怎么回事啊?

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最新回复

wu11998866 (2012-9-01 16:34:18)

流式是否校准过？测荧光微球的CV值是多少？

那种细胞？
one (2012-9-01 16:34:53)

我也准备上流式细胞仪，请问朋友：用人的淋巴的细胞分离液如何用于鸡的淋巴细胞分离，应该加多少泛影葡胺。
wu11998866 (2012-9-01 16:35:13)

如果仪器已经经过校正，请查看你的方案中FL2单参数图中的横坐标是否为对数增加。如果横坐标为线性增加，就有可能出现你说的这样的图形。
ladyhuahua (2012-9-01 16:35:37)

你应该把图发上来，否则只能推测。你看看以下设置是否正常：
1. 阈值是否设在FSC上，FACSCalibur机器通常阈值52。
2. 是否用FL2W-FL2A图进行去除粘联体设门
3. 是否将所有荧光通道设为Lin线性
4. FL2的电压是否够强

相信问题出在这几方面。
avi317 (2012-9-01 16:36:03)

非常感谢大家,楼上战友提出的横坐标为线性增加就可能出现这种情况,但是我们以前也一直是为线性增加啊,图都非常正常,我明天再去试一试,按照你提的几点来改进,看看如何.非常感谢大家哈!!
avi317 (2012-9-01 16:36:25)

没有来得及从流式中烤出来，只是照了张相片大家帮忙看看哈！

28126540.snap.jpg
yychen (2012-9-01 16:36:51)

如果仪器已经经过校正，请查看你的方案中FL2单参数图中的横坐标是否为对数增加。如果横坐标为线性增加，就有可能出现你说的这样的图形。

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应该是线性！

为什么会是这样的图？？？
呵呵。

不是细胞不好就是机器没校正。因为以前都是这样操作的！

楼主要是解决了问题要告诉我们哟，很想知道！
yychen (2012-9-01 16:37:14)

1，首先排除上机问题，也就是上机的人的技术和仪器的准确性。本实验很简单，基本上不会是人的问题。仪器问题可以从其他人的结果看得出！如果别人都正常，则考虑如下问题。

2，细胞状态。a:镜下观察细胞形态 b:fsc/ssc的成团情况如果以上都正常，考虑下面问题。

3，对照组情况，对照如果正常，各组间PI染色操作也都相同的话，则考虑是凋亡诱导的问题。否则4！

4，对照和试验组都是这种情况，考虑pbs的配制是否正确、pc buffer（如果您用了的话）的ph值和渗透压、离心机的离心力等。如果都没问题，5！

5，对不起，我实在没办法，请高手出马！！

好运！！
moonlight45 (2012-9-01 16:37:33)

我想请教各位作流式时细胞可以用胰酶消化下来吗还时用刮的,消化的会有影响吗
u234 (2012-9-01 16:37:57)

只要消化没有损伤细胞就不会有问题