[求助]细胞传代培养请教

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• ROSE李 (2012-9-03 13:29:12)

  请问在细胞传代培养过程中吹打细胞时总是出现很多气泡该如何避免，另一个问题就是细胞总是扎堆，该如何避免和处理？多谢指点。
  
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  气泡是正常现象，因为培养基中有血清存在。
  细胞总是扎堆，首先要弄清该细胞是否正常情况下就聚集生长。如果不是，原因多因为是消化不充分，吹打不充分。吹打要特别注意不要集中在一个地方打，你可以将培养瓶吹打面分成六个区，每个区打2-3下。吹打的力度也要掌握。力气过大，细胞容易损伤，而且可能溅出来，容易污染。力气过小，细胞容易成团。

• yhz1973 (2012-9-03 13:29:38)

  一般来说细胞传代的时候气泡不是很好避免，因为有血清的存在。
  自己认为在传代的时候吸取液体以后将吸管拿出来在吹打，但是距离液面不要太远，如果在液面下吹打，是比较容易起泡的
  如果你认为细胞总是扎堆，可以多吹打几次，或者离心处理1000r/min，5min
  有的人认为离心对细胞有损伤，但个人认为，离心的好处是可以去处胰酶的影响，虽然在加入含血清的培养基后胰酶基本不起作用了。其实自己在培养过程中两种都试过，自己觉得不会很影响细胞生长。离心主要是在需要细胞记数的时候比较好，平时可以不用离心，省事。呵呵

• 66+77 (2012-9-03 13:29:59)

  
  我现在用EDTA消化细胞，一般消化多长时间合适？

• windy+++ (2012-9-03 13:30:31)

  我现在用EDTA消化细胞，一般消化多长时间合适？
  
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  一般根据显微镜下细胞形态改变,决定消化时间.含有EDTAD 的消化能力强于一般胰酶

• 49888 (2012-9-03 13:31:04)

  
  气泡不太好避免，需要足够耐心，要温柔。每次吸进吸管得培养基不完全吹出，留一点，也就是不人为得吹进气体，气泡要少得多
  一般有点气泡也没多大关系
  
  今天师弟刚发现样了一种肝细胞，胰酶怎么吹都无法吹散。后来胰酶里加了点EDTA就很好吹了，不知道有没有借鉴意义。

• dongdongqiang (2012-9-03 13:31:31)

  细胞传代是个细活阿，胰酶的量，消化时间，及时吹打终止消化都很重要，防止污染更不必说了

• ffooll (2012-9-03 13:32:20)

  
  “慢吸快吹“ 可能会避免气泡的产生，但吹的时候尽量不要将吸管中的液体全部吹掉。你试一下看效果怎样！其实还需要自己在实验中慢慢摸索，总结经验。比如慢和快的相对关系，吸管和培养瓶的角度等等。
  EDTA溶液的作用机制是通过鳌合Ca离子和Mg离子破坏细胞间的连接进行消化。消化时间一般几分钟，但还和细胞黏附特性，消化液的浓度，温度 有关。最好加入消化液放37度孵箱内放置2分钟之后镜下观察细胞形态来判断是否终止消化。
  我师兄消化的时候很少在镜下观察，他根据培养瓶的细胞生长面情况来判断是否终止消化。适度的消化会看到生长面出现网格状的现象。和消化前是不一样的。我的经验还很少，这些是我的一点小结。

• BUK (2012-9-03 13:32:44)

  
  偶很想请教一个问题，如何在传代时候，获得比较多的细胞呢？

• kewanqi2011 (2012-9-03 13:33:24)

  我们避免吹打时产生气泡的方法是，用不含血清的培养液吹，量少一点，然后再加含血清浓度高一点的培养液，使最终血清浓度在你的要求范围内。
  细胞扎堆说明吹打不充分，消化不彻底，适当延长一点时间，当然要镜下观察，千万不要过了。吹打也是技术活，要慢慢练的，祝你成功！