[分享帖]我养血管内皮细胞！

最新回复

• kswl870 (2012-9-08 15:32:38)

  
  今天刚从朋友那里拿来长满了的细胞要进行传代！
  按别人的经验，内皮细胞消化时间比较长，但我用了三十分钟才搞好！
  原因可能为：1：用PBS清洗时没把原来的培养液洗干净；2：更重要的原因是，我开始时每隔两分钟就从温箱里拿出来观察一次，以致没把酶的温度升起来，后改为每四分钟观察一次。终于逐渐有消化！
  到26分钟时已经开始消化，但我仍然在4分钟后观察，发现已经消化过头！以致后来出现细胞过少的情况！
  教训：对时间的的把握太僵硬！

• rxcc33 (2012-9-08 15:32:55)

  什么内皮细胞啊？日记要交代清楚哦。

• kswl870 (2012-9-08 15:33:24)

  
  我的是HUVEC！

• kswl870 (2012-9-08 15:34:42)

  
  不 少站友养HUVEC都加ECGS或ECGF，但根据我们师兄的经验，只要最基本的培养液就行即DMEM+新生牛血清15%+肝素，他的最大经验是：尽量减少可能的污染环节！我的培养液则是1640+10胎牛+10新生牛+肝素，不加ECGS或ECGF，希望可以养起来！

• kswl870 (2012-9-08 15:35:11)

  你尝试过没有ECGS或ECGF进行培养么？

• xingyi08 (2012-9-08 15:36:59)

  
  不知你用的血清是进口的还是国产的，没听说过胎牛和新生牛一起混用的，不知效果会好？

• S6044 (2012-9-08 15:37:46)

  我这里因为不缺少生长因子，用我师兄的话说，玩生长因子的，呵呵。所以，没有尝试过，据说长得非常慢，时间就是金钱，还是大方点吧。
  而且，最好用胎牛吧，实验顺利的话，其实不是很费钱的，但是，实验不顺利的话，又费钱，又费力气，而且心情也不好。
  
  我现在最头疼的是，我的HUVEC传代到8代了(原则上用2-7代的细胞)，都不见老化，每次1:2传代还长那么旺盛，而我手头养了3根脐带的内皮了，一个培养箱，里面全是内皮类的细胞。
  今天实在受不了了，一气之下冻存了6瓶第三代的。最近养HUVEC估计费了100个培养瓶了吧。每次一换液，就是200ml换进去，提蛋白都是10瓶提一次，好累。
  
  为了省胎牛血清，我现在是1:2的比例加入胎牛和新生牛血清，状态特别好的时候1:1，能省点是点吧，感觉没有什么差别。

• kswl870 (2012-9-08 15:40:25)

  
  看来主任有很多细胞啊，那我就不怕我的细胞死光了！
  另外，别人好象一般三代后就很难保持状态了，你有什么心得呢？说给大家听听啦！

• kswl870 (2012-9-08 15:41:31)

  今天去看细胞，还不错，已经开始成片状聚集生长了，虽然还不多，但已经开始成埔路石样！
  关于血清的配制，可能是个错误！因为我查资料看到别人说胎牛、新生牛各15%，问别人后都觉得太高了。因此改为各10%，故有此配置！想想可能我误解别人了，可能原本意思是胎牛或新生牛15%的。先将错就错，先养试下，不行再改了。因为我们附近实验室有人只用10%牛就可以养，我想我的在营养角度看应该没问题吧！但由于血清浓度高，导致培养液颜色偏黄，恐怕不太好判断什么时候该换液。主任有此经验么？

• tieshazhang (2012-9-08 15:43:45)

  
  没有关系，内皮细胞喜欢酸性的环境，当然也是适可而止啦。
  配培养液的时候，如果要考虑到血清的话，所以可以稍微配碱一些。

• kswl870 (2012-9-08 15:45:03)

  
  第三天换液，发现细胞生长形势喜人！除了局部地方外已经基本长满了！没长满的地方可能是因为分布不够均匀！而当初过高的血清浓度似乎有利于细胞生长，营养丰富可能是其一，而血清浓度高造成的偏酸环境有利于内皮细胞生长则是其二！
  现在的问题是，我再次配培养液时是不是再按这个比例？这一批的血清应该可以混用，但是下次的不再敢混用，因为不同的批号血清好象一般都不能混用的！

• kswl870 (2012-9-08 15:45:26)

  今天瓶子中的细胞已经长满了，我决定冻存点细胞，根据上次的经验，注意胰酶消化前清洗干净残留的培养液，13分钟即消化好而且有点过，以致离心后细胞偏少，一瓶细胞只能冻存一枝！
  今天为止，我进行了一轮细胞培养操作，感觉还算不错！
  与别人不同，我养血管内皮细胞未加EVGF和ECGS，但血清浓度比一般的要高，这可能是不需要加生长因子的原因！

• kuaizige (2012-9-08 15:45:46)

  
  楼上各位大哥都是哪的呀？
  我现在福州，急需一些HUVEC做实验，方便的话送一点可以嘛？感激涕零哪！

• kswl870 (2012-9-08 15:46:21)

  
  我在武汉，具体要怎么寄我不清楚，如果你能叫人过我这里来拿我很乐意提供！你有朋友在武汉么？

• kuaizige (2012-9-08 15:46:43)

  
  楼主 你好,我是北京的,但我有朋友在武汉,而且她也在从事这方面的实验,方便的话能不能送我们一些,或者我们也可以从你那买.

• BUK (2012-9-08 15:47:07)

  请问楼主，你的HUVEC是细胞株还是原代培养来的?

• kswl870 (2012-9-08 15:48:54)

  
  近一周来，我从别人那拿到HUCEV，作为细胞培养的菜鸟，我很庆幸我能在不到一周的时间内从细胞传代开始到最后进行细胞冻存。经过这一轮的细胞培养。我得到相关以下经验：
  1：HUVEC培养要坚持绝对的无菌观念；绝断任何可能的污染途径
  2：HUVEC培养并非想象的那么难；老实说，按目前我的经验，其实很简单。
  3：HUVEC培养不一定需要内皮细胞生长因子或内皮细胞生长物而是要给予足够的营养；
  4：多问有经验的人，不懂的一定要问，将得到事半功倍的效果；

• whitesheep (2012-9-08 15:49:16)

  我有朋友在武汉，可是他对这些一窍不通啊，所以你的惠赠我无法接收啊！
  我决定自已原代培养一些，祝我成功吧！

• whitesheep (2012-9-08 15:49:43)

  那位战友分离或养过小鼠的肺部毛细血管内皮细胞(LMVEC或 PMVEC)?大家交流一下啊.

• summerxx (2012-9-08 15:51:33)

  那位战友分离或养过小鼠的肺部毛细血管内皮细胞(LMVEC或 PMVEC)?大家交流一下啊.
  
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  似乎极难养出来(一般都是贴块法)，如果没有足够的毅力、经费和细胞原代培养经验，建议放弃。
  我做过5、6次都没有成功，实在想做的话，可以考虑用磁珠分选试试，用小鼠乳鼠。
  
  和种属可能有一定的关系，或者可以考虑大鼠吧。