[求助]有关转染

最新回复

• zwsyrt (2012-9-09 11:24:33)

  
  转染不成功不仅和你所用转染试剂是否适合所要转染细胞系有关，还和你所转染的DNA等物质的量，质量，转染试剂与所需转染的物质的比例，转染前细胞密度，生长状态等等因素有关，我用过几家公司的转染试剂，有invitrogen的，有罗氏的，觉得效果都还可以的,Qiagen的没有用过，不过如果你的转染试剂说明书上有说适合你所用细胞系，我觉得你主要还是应该从其他方面找原因。

• dog002 (2012-9-09 11:24:51)

  
  DNA的质量影响很大，最好用可以去熱原的试剂盒提取。而且如果要筛选稳定表达克隆，理想的应该将质粒线性化。
  我们实验室试过lipofectamine,fugen,多聚阳离子，电穿孔（amax system）等等，总体感觉invitrogen的lipofectamine2000无论对悬浮还是贴壁细胞都效果较好。
  仅供参考，欢迎指正。

• fklo83 (2012-9-09 11:25:10)

  MEF 是差异很大的细胞系，有的非常容易（70%），有的就很难，这是他不同于其他稳定的细胞系的。

• dog002 (2012-9-09 11:25:29)

  
  对不起，说错了。应该是去内毒素而非去热原的DNA提取试剂盒。

• redbutterfly (2012-9-09 11:25:51)

  
  谢谢各位大虾的帮助，请“有的非常容易（70%“ 是指细胞长到70%的时候转染吗，这样细胞是不是太密了，转染多长时间啊？

• redbutterfly (2012-9-09 11:26:33)

  
  细胞如果有支原体污染是不是也会影响转染？怎样检测支原体污染？

• c86v (2012-9-09 11:26:49)

  不是， 是指转染的成功率。

• lagua123 (2012-9-09 11:27:11)

  
  楼上说70%是指成功率, 是怎么计算出来的,细胞要长到什么程度进行转染比较好呢,请赐教 !

• lagua123 (2012-9-09 11:27:33)

  
  我实验是在转染BK质粒时试过多种转染试剂,比较理想的是lipofectamineTM Reagent, 可以试试的

• xyw5 (2012-9-09 11:27:54)

  
  细胞长到70%的时候转染，细胞不是太密，但根据你转染所用的转染试剂有关，比如Lipofectamine2000,说在细胞80-95%时转染成功率最高。转染时间看你需要瞬时表达还是稳定表达，瞬时表达48-72小时，稳定表达你还需筛选，2-3个月可以达到稳定表达效果。