【求助】是不是配好的胰蛋白酶溶液在4度冰箱中...

最新回复

• skytree (2012-9-09 13:53:31)

  
  实际操作中没有这么严重的，我们实验室都是一直放在4度，直至用完。
  我个人建议配好后，分装成小包装，负20度保存。平时用的就放4度就可以了，我是这样做的。

• xingyi08 (2012-9-09 13:54:06)

  我们一般是配好后-20储存，另外用10ml的小青霉素瓶分装出一些（十几个瓶子，够用一段时间了），冻存。需要时，取出一支，只要流水冲几分钟就可以化开，很方便使用，如果是60mm的皿，差不多能用两三次。这样既保证消化液的活性，也避免了意外污染。

• misswu61 (2012-9-09 13:54:31)

  
  胰酶保存应该在-20度，但可以分装，拿一支放4度，知道用完为止。

• windy+++ (2012-9-09 13:54:49)

  
  我个人觉的放在-20度比4度要好，胰酶活性能保留更长时间，以前我放4度，结果用了几次后，就能明显感觉很难消化下来，而放-20度至少一个月内活性是基本不会变的。

• lixi559 (2012-9-09 13:55:08)

  
  -20可以放置半年
  放4度一个月也没问题
  需要注意的是一定避免反复冻融

• 969 (2012-9-09 13:55:27)

  
  你们分装胰蛋白酶用什么器皿？用青霉素之类的安剖瓶，盖子的问题如何解决？如果用原来的塑料瓶塞行吗？是否还要用封口膜？放在4度常用的也用吗？

• lixi559 (2012-9-09 13:56:01)

  
  就是安剖瓶，10ml20ml都行，用橡胶塞，扎过眼的也行，过滤后一定要封口

• milkdog (2012-9-09 13:56:33)

  
  我们实验室一般就是一个配了以后,大家蜂拥而上把它全部分光,这样每个人手上也不会很多,一般就只有一个小细胞瓶的三分之二左右,这个东西也不要放的太久,用完又配!!!但是一般放个几个月到半年也没有出现什么问题!

• zwsyrt (2012-9-09 13:56:58)

  
  胰酶建议配好后分装到小瓶子里（10ml），－20摄氏度冻存，用的时候取出，37度水浴融化，消化的时候一般每次每瓶细胞就用5ml左右，用不了的继续－20冻存，10ml两次就用完，不存在反复冻融的问题。尽量不要4度保存，会影响酶的活性。
  不赞成几个人分用同一瓶胰酶，因为每个人的操作习惯不一样，万一谁要不注意，大家跟着倒霉。

• any333 (2012-9-09 13:57:25)

  
  胰酶活性的最适合温度是多少度？是37度吗？在做细胞传代之前，把胰酶从4度冰箱里拿出来放进生物安全柜里用紫外线照好呢？还是放37度温箱里暖暖好呢？你们的习惯是什么？有什么理论或书面依据吗？谢谢各位战友帮忙啊

• zwsyrt (2012-9-09 13:57:51)

  胰酶活性的最适合温度是多少度？是37度吗？在做细胞传代之前，把胰酶从4度冰箱里拿出来放进生物安全柜里用紫外线照好呢？还是放37度温箱里暖暖好呢？你们的习惯是什么？有什么理论或书面依据吗？谢谢各位战友帮忙啊
  
  ————————————————————————————
  
  第一个问题：最适温度37度
  第二个问题：轻轻的我先问你吧，蛋白质能照紫外线？
  一般37度水浴就行了，水尽量不要漫过瓶塞

• any333 (2012-9-09 13:58:15)

  
  不好意思了，刚开始养细胞，太糗了。楼上的，谢谢了！我好晕啊，难怪有时候消化好久呢嘻嘻

• ending (2012-9-09 13:58:48)

  第二个问题：轻轻的我先问你吧，蛋白质能照紫外线？
  
  ————————————————————————————————————————————————
  
  按照道理，紫外线是无法穿透装胰酶的容器的，所以问题并不是出现在照不照上，还是温度的问题

• windy+++ (2012-9-09 13:59:13)

  
  我一直在用的是厂家配好的加0.02%EDTA的胰酶，就放在4度冰箱里，放几个月活性还是很好的。用之前从冰箱里拿出来，室温放置30min就用，温度大概就20度吧

• 2541 (2012-9-09 13:59:30)

  
  就可用来说
  室温放置一段时间（1个星期或更长）一样用酶活性！
  有人粗放的做试验的话，基本不放-20度！

• 969 (2012-9-09 13:59:59)

  
  我想问一下，你们在用D-hanks液配制胰蛋白酶的时候，调过它的PH值了吗？在D-hanks液高压前还是后调？要是PH值不在7.2左右，用什么调节，时NaHCO3吗？用来调节PH值的NaHCO3怎么配制，浓度多少？谢谢！

• dragonkilly (2012-9-09 14:00:17)

  
  当然要调PH值啊，一般在D-hanks液高压后调，如果偏酸用NaHCO3调，如果偏碱用盐酸调，NaHCO3溶液应配成3.7％，即3.7gNaHCO3溶解定溶到100ml